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申请/专利权人：湘潭大学
摘要：本发明提供了一种激活式锤头核酶反式切割荧光RNA传感器检测大肠杆菌中SgrSRNA的方法。检测方法由两个模块组成：激活式核酶和发夹底物。将锤头核酶的5′结合臂设计为部分可以与靶标核酸碱基互补的发夹结构，锤头核酶5′端的结合臂被锁住，仅靠3′端一侧的结合力无法识别底物激活切割活性，锤头核酶转化为能够靶标响应激活的反应探针。选择荧光RNA适配体“芒果”作为信号输入模块，“芒果”被设计成双茎发夹结构为此破坏二级结构使其无法与染料结合，同时，发夹环上设计为可以被锤头核酶识别并结合的序列。双茎发夹结构可以牢牢的锁住“芒果”，大大的降低背景信号。靶标序列打开锤头核酶的发夹结构，暴露出锤头核酶完整的两侧结合臂，锤头核酶识别结合并切割发夹底物，释放出荧光RNA适配体“芒果”，“芒果”恢复正确二级结构，结合染料TO1‑Biotin，恢复荧光信号，达到检测目的。
主权项：1.一种激活式锤头核酶反式切割荧光RNA传感器检测大肠杆菌中SgrSRNA的方法具体方案如下1提供反应混合物，其中所述反应混合物包括模板链1，模板链2，T7启动子，核苷酸单体混合物，T7RNA聚合酶和染料TO1-Biotin，所述的模板链1设计成可以转录出探针激活式核酶的DNA单链。所述的模板链2设计成可以转录出探针发夹底物的DNA单链。2将所述反应混合物置于反应温度37℃，所述的模板链1可以与T7启动子碱基互补成DNA双链。所述的模板链2可以与T7启动子碱基互补的DNA双链。3步骤2中的碱基互补产物可以在T7RNA聚合酶的作用下转录出激活式核酶和发夹底物。4将待测样品加入步骤3所述混合溶液中，激活式核酶与目标SgrSRNA碱基互补，恢复锤头核酶的切割活性，识别并切割发夹底物，释放出荧光RNA适配体“芒果”，“芒果”结合并激活染料TO1-Biotin，恢复荧光信号。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 湘潭大学 一种激活式锤头核酶反式切割荧光RNA传感器检测大肠杆菌中SgrS RNA的方法
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