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申请/专利权人：华南理工大学
摘要：本发明公开了一种无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法及其应用。将天然的RNA引发链与PolyU聚合酶反应缓冲液混合，以含有非天然碱基的核糖核苷三磷酸为底物，在PolyU聚合酶或其突变株的催化下，通过酶促反应获得3'末端含有非天然碱基的RNA链。3'末端含有非天然碱基衍生物TPT3AlTP的RNA链则可以继续与N3‑AF488等叠氮修饰的荧光或其它功能性基团进行click反应，实现RNA的荧光或其它功能的正交标记。该方法合成含有非天然碱基的RNA效率高，成本低，操作方便，副产物少，不产生污染性废物，在酶法合成含有非天然碱基的RNA链和功能性RNA末端标记中具有潜在应用价值。
主权项：1.一种无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法，其特征在于，包含以下步骤：1将天然的RNA引发链与PolyU聚合酶反应缓冲液混合均匀，得到混合液1；2向步骤1所得混合液1中加入含有非天然碱基的核糖核苷三磷酸TPT3TP、NaMTP或TPT3AlTP中的任意一种，得到混合液2；3向步骤2所得混合溶液2中加入野生型的PolyU聚合酶、突变点位为H336R的PolyU聚合酶或突变点位为H336R，N171A和T172S的PolyU聚合酶，得到混合液3；4将步骤3所得混合液3进行孵育，得到3'末端含非天然碱基的RNA链的混合液4；5在步骤4所得混合液4中加入上样缓冲液，加热处理，使含非天然碱基的RNA链完全变性，通过变性胶，分析野生型的PolyU聚合酶、突变点位为H336R的PolyU聚合酶或突变点位为H336R，N171A和T172S的PolyU聚合酶将非天然碱基添加到RNA链3'末端的效果。
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百度查询： 华南理工大学 一种无模板酶法合成含非天然碱基的核糖核酸链的方法及其应用
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