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申请/专利权人：云南省肿瘤医院(昆明医科大学第三附属医院)
摘要：本发明涉及一种NEXN基因高表达型骨肉瘤细胞系及其构建方法与应用，属于医学技术领域。把NEXN基因的编码序列插入慢病毒载体质粒，得到NEXN过表达慢病毒载体质粒；把NEXN过表达慢病毒载体质粒与PSPAX2、PMD2.G质粒一起采用脂质体的方法共转染293T细胞中，制得重组慢病毒；利用重组慢病毒侵染人骨肉瘤细胞系细胞，并利用嘌呤霉素进行筛选，获得阳性细胞；将筛选的阳性细胞扩大培养，即构建得到NEXN基因高表达型骨肉瘤细胞系。本发明构建得到的NEXN基因高表达型骨肉瘤细胞系可以用于构建肺转移骨肉瘤模型动物，还可以用于药物筛选，并可用于骨肉瘤肺转移的病理学与药理学研究，易于推广应用。
主权项：1.一种NEXN基因高表达型骨肉瘤细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），质粒构建：把NEXN基因的编码序列插入慢病毒载体质粒pLV4ltr-PGK-ZsGreen2APuro-CMV的CMV启动子下游，得到NEXN过表达慢病毒载体质粒pLV4ltr-PGK-ZsGreen2APuro-CMV-NEXN；所述的NEXN基因的编码序列如SEQIDNO.11所示；步骤（2），慢病毒包装：将步骤（1）得到的NEXN过表达慢病毒载体质粒pLV4ltr-PGK-ZsGreen2APuro-CMV-NEXN与PSPAX2、PMD2.G质粒一起采用脂质体的方法共转染293T细胞中，制得重组慢病毒；步骤（3），细胞系构建：利用步骤（2）制得的重组慢病毒侵染人骨肉瘤细胞系细胞，侵染24h后更换为筛选培养液，并向筛选培养液中加入嘌呤霉素进行筛选，获得阳性细胞；所述的人骨肉瘤细胞系细胞为人骨肉瘤细胞系HOS细胞或人骨肉瘤细胞系143B细胞；其中，侵染24h后更换的筛选培养液为89%MEM+10%FBS+1%双抗；步骤（4），扩大培养：将筛选的阳性细胞扩大培养，即构建得到NEXN基因高表达型骨肉瘤细胞系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 云南省肿瘤医院(昆明医科大学第三附属医院) 一种NEXN基因高表达型骨肉瘤细胞系及其构建方法与应用
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