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申请/专利权人：湖南信息学院
摘要：本发明公开了一种结合光电和比色双模式检测金黄色葡萄球菌的方法，在光电检测部分中，由于涉及内源性酶的反应直接发生在溶液中，因此，简单地将TiO2@CdS滴涂到ITO电极表面上。无需固定额外的生物分子，从而显著减少了非特异性吸附，提高了生物传感器的稳定性和重现性。对于比色检测，利用了一种基于KI和淀粉的低成本且操作简单的方法。这种光电化学比色方法对金黄色葡萄球菌的线性范围为102‑109CFUmL，检测限分别为7和10CFUmL。由于噬菌体特异性识别细菌后再裂解细菌释放内源性CAT，确保了金黄色葡萄球菌的特异性检测之外，甚至能够区分活细菌和死细菌。双信号读出模式提高了检测精度和可靠性。
主权项：1.一种结合光电和比色双模式检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：包括以下步骤：1将1mL108PFUmL的JS25噬菌体与1mL不同浓度的金黄色葡萄球菌在2mL离心管中混合，将混合物在37℃的摇床中孵育，并以180rpm搅拌3h；反应结束后，将混合物以4000rpm离心，得到含有释放的CAT的1.8mL上清液；然后，将200μL500mMH2O2加入到1.8mL上清液中，并在37℃和180rpm下保持45min，得到测试溶液；2依次用丙酮、乙醇和水超声清洗ITO玻璃，干燥；用绝缘胶打孔固定电极，形成直径为0.4mm的圆形电极工作区；将20μL0.5mgmL的TiO2@CdS溶液滴涂到ITO玻璃上并干燥以供进一步使用；通过混合8960μL10mMpH7.2-7.4的PBS、40μL4mM的AA和1mL测试溶液来制备电解质溶液，在波长λ400nm的氙灯和0V的电化学工作站下测量光电流；3通过加入450μL去离子水、300μL20mM的KI、150μL20mM的HCl和50μL5mgmL的淀粉溶液制备比色管，向比色管中加入50μL测试溶液，并使反应进行1min，然后观察颜色并测量570nm处的UV-Vis吸收，检测金黄色葡萄球菌在102-109CFUmL的线性范围内，分别达到7和10CFUmL的检测限。
全文数据：
权利要求：
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