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申请/专利权人：华南农业大学

摘要：本发明公开了一种用于同时检测13种食源性致病菌的试剂盒及其应用。本发明提供的可视化试剂盒可以同时检测食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌、恶臭假单胞菌、拟态弧菌、溶藻弧菌、肠道沙门氏菌、霍乱弧菌、福氏志贺氏菌、阪崎克罗诺杆菌、肠出血性大肠杆菌、溶血性链球菌、副溶血性弧菌、单细胞增生李斯特菌、创伤弧菌13种食源性致病菌，所采用的引物与探针均具有较强的特异性，能区分种属关系较亲的细菌，如3种不同血清型的大肠杆菌，同时能够避免多种食源性致病菌检测易出现假阳性的问题，不仅缩短了检测时间，还具有更低的检出限和更高的灵敏度，以及较好的重现性和稳定性，可直接定性分析结果，能够很好满足大规模食品的快速检测的需要。

主权项：1.一种用于同时检测13种食源性致病菌的可视化试剂盒，其特征在于，包括同时检测13种食源性致病菌的DNA芯片和检测13种食源性致病菌的多重不对称PCR引物；所述DNA芯片包括固相载体和固定在固相载体上的寡聚核苷酸探针，所述寡聚核苷酸探针为小肠结肠炎耶尔森氏菌Yersiniaenterocolitica、恶臭假单胞菌Pseudomonasputida、拟态弧菌vibriomimicus、溶藻弧菌Vibrioalginolyticus、肠道沙门氏菌Salmonellaenterica、霍乱弧菌vibriocholerae、福氏志贺氏菌Shigellaflexneri、阪崎克罗诺杆菌Cronobactersakazakii、肠出血性大肠杆菌EscherichiacoliEHEC、溶血性链球菌Streptococcuspyogenes、副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus、单细胞增生李斯特菌Listeriamonocytogenes和创伤弧菌Vibriovulnificus的探针；具体探针序列为：小肠结肠炎耶尔森氏菌-P：5’-TGTGTACGCTGCGAGTG-3’；恶臭假单胞菌-P：5’-TTTTTTTTTTTTTTTGTCGGGTGGCTG-3’；拟态弧菌-P：5’-TTTTTTTTTTGTGAACCAAAGTTGGGA-3’；溶藻弧菌-P：5’-TTTTTTTTTTCAAATTGGTTGAT-3’；肠道沙门氏菌-P：5’-GGGTCGTTCTACATTGACAGAAT-3’；霍乱弧菌-P：5’-TTTTTTTTTTCTGCCAACTCACTTTGAG-3’；福氏志贺氏菌-P：5’-TTTTTTTTTTTTTTGGTTTCCTCTGAGT-3’；阪崎克洛诺杆菌-P：5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGGCCGCTGATAC-3’；肠出血性大肠杆菌-P：5’-GCTAATCCTTGGCCT-3’；溶血性链球菌-P：5’-ACGCACTAAACCCTTCAGCTC-3’；副溶血弧菌-P：5’-GGTTGGTTGTACTGGGGCAG-3’；单细胞增生李斯特菌-P：5’-AGATCATTTAGATAACGACTAGCGT-3’；创伤弧菌-P：5’-TGCGAACTTAGCACAGATGCGAACTTAGCACAGA-3’；所述多重不对称PCR引物的核苷酸序列为：小肠结肠炎耶尔森氏菌：Y.e-F：5’-Biotin-TTCATAACGGTACTTCAGGT-3’；Y.e-R：5’-CTGTTTATCAATTGCGTCT-3’；恶臭假单胞菌：P.p-F：5’-Biotin-CCAAGGTCGTTTCCA-3’；P.p-R：5’-GGATGTTCAGCTTGACG-3’；拟态弧菌：V.m-F：5’-Biotin-ATGGAACTGAGCCTTGAAG-3’；V.m-R：5’-CACCGCAAAGAAGCC-3’；溶藻弧菌：V.a-F：5’-Biotin-CGTTTTGTTGGTGTTTAGGT-3’；V.a-R：5’-CATTCCTGAACTCTGGTGT-3’；肠道沙门氏菌：S.e-F：5’-Biotin-ATTAACAGTACCGCAGGA-3’；S.e-R：5’-CTACTTAACAGTGCTCGTTT-3’；霍乱弧菌；V.c-F：5’-Biotin-CCAAGAAGGTGACTTTATTG-3’；V.c-R：5’-CAGCGAGGACTTCAAAAC-3’；福氏志贺氏菌：S.f-F：5’-Biotin-AAGCCTACCAGCCGTA-3’；S.f-R：5’-TCTTCGAGGATGATAGTGC-3’；阪崎克洛诺杆菌：C.a-F：5’-Biotin-GATTTTCGATGAAGTGGA-3’；C.a-R：5’-GGGTTTCGGTCATCG-3’；肠出血性大肠杆菌：E.coli-F：5’-Biotin-AAAACACTTTATGACCGTTGT-3’；E.coli-R：5’-CGCAGATATTTGTCATCC-3’；溶血性链球菌：S.p-F：5’-Biotin-TTGGTAACCGTTGAAGC-3’；S.p-R：5’-CGGACGTAACTTCTACCAT-3’；副溶血弧菌：V.p-F：5’-Biotin-CTGCCATTCATTTGATGTA-3’；V.p-R：5’-TTTGGCCGTATCTATCC-3’；单细胞增生李斯特菌：L.m-F：5’-Biotin-GTCTAGTAGAAAAGAAGAAGTCC-3’；L.m-R：5’-GTTTCCCAGGAAGTTTG-3’；创伤弧菌：V.v-F：5’-Biotin-GACTTGTTGTAATGTGGGTT-3’；V.v-R：5’-GATCGTTGTTTGACCGTA-3’。

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权利要求：

百度查询： 华南农业大学 一种用于同时检测13种食源性致病菌的可视化试剂盒及其应用