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申请/专利权人：曲阜师范大学
摘要：本发明属于细胞培养领域，更具体地，涉及一种保持稳定性状的小鼠骨髓树突状细胞的原代培养方法。利用本发明提供的方法经过7‑8天的培养可获得足量的BMDC细胞，本发明通过采用特定的培养条件，阶梯式改变CO2的浓度，提高树突状细胞的培养数量。本发明还对所得的BMDC细胞进行了光镜下观察、流式细胞仪检测CD11c阳性率以及扫描电镜的观察以及方法优化。利用本发明的方法每只小鼠可以在6‑8天内诱导培养2‑3×107及以上的树突状细胞。形态上变现为存在有细胞伪足。经流式细胞仪检测发现CD11c+阳性率达94.9%以上，满足常规实验需求。扫描电镜下也可观察到细胞立体结构特别是微绒毛。
主权项：1.一种保持稳定性状的小鼠骨髓树突状细胞的原代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将离断得到的小鼠的股骨和胫骨，冲洗骨髓干细胞，利用注射器吸取1mLRPMI-1640培养基从骨骺端刺入骨髓腔中并从另一端刺出，脉冲式推动注射器，反复冲洗骨髓腔，直至股骨、胫骨变白，得到冲洗下来的骨髓细胞；（2）将所得骨髓细胞离心，弃上清，将沉淀中加入红细胞裂解液，混匀后冰上静置，加入PBS后离心后弃上清；（3）将离心所得的细胞悬于RPMI-1640基础培养基中，悬液过200目细胞筛收集起置于离心管中，离心后弃上清；（4）将离心所得细胞重悬于完全培养基混匀，接种于6孔板中，置于培养箱中采用梯度式CO2培养；所述梯度式CO2培养的具体过程为：首先培养箱中3%CO2条件下培养12h，然后在5%CO2条件下培养36h；所述培养的温度为37℃；（5）培养结束后，弃去上清液以及悬浮细胞，加入等量的完全培养基；（6）第4、6天半量更换完全培养基；（7）第7-8天，收获BMDC。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 曲阜师范大学 一种保持稳定性状的小鼠骨髓树突状细胞的原代培养方法
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