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申请/专利权人：北京石油化工学院
摘要：本发明公开了一种用于测试肌肤敏感性的细胞模型及其应用，属于细胞模型的构建技术领域。其是一种稳定过表达人角质形成细胞中TRPV1离子通道蛋白形成的敏感皮肤细胞模型。使用慢病毒稳定转染HaCaT细胞获得过表达TRPV1细胞株HaCaT‑TRPV1‑FLAG，造成细胞内的Ca2+离子流增加，建立敏感皮肤细胞模型，用于评价化合物、天然产物及药品的对皮肤敏感的影响，并验证其对TRPV1通路的机制探究。该用于测试肌肤敏感性的细胞模型，可用于化合物、天然产物及药品对敏感细胞的Ca2+离子内流情况检测以评价其对敏感皮肤的影响；还用于检测天然产物提取物对细胞中TRPV1离子通道表达的影响。
主权项：1.一种用于测试肌肤敏感性的细胞模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、利用pLv表达载体构建TRPV1-FLAG慢病毒稳转质粒，其中，所述TRPV1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；S2、pLv-TRPV1-FLAG慢病毒包装质粒获得：将所述S1中获得的慢病毒稳转质粒pLv-TRPV1-FLAG利用大肠杆菌转化、无内毒素质粒提取后，获得慢病毒包装质粒pLv-TRPV1-FLAG；S3、HaCaT-TRPV1-FLAG稳转细胞株病毒模型的获得：1使用离体的人胚肾细胞制造慢病毒，待细胞密度达到80％，留作备用；2磷酸钙转染混合体系的配置：将pLv-TRPV1-FLAG质粒、慢病毒包装质粒和2.5M氯化钙混合，加去离子水至500μL，逐滴加入2×缓冲液混合制备成转染混合液；3HaCaT-TRPV1-FLAG稳转细胞株病毒模型的获得：将所述转染混合液加入到含有慢病毒细胞的培养皿中，并与37℃下置于质量分数为5％的二氧化碳保温箱中培养，待转染混合液加入到慢病毒细胞中开始计时，48h后收集培养上清液，上清液经离心、膜过滤、分装后，得到HaCaT-TRPV1-FLAG稳转细胞株病毒模型。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京石油化工学院 一种用于测试肌肤敏感性的细胞模型及其应用
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