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申请/专利权人：北京再生生物科技研究院有限公司

摘要：本发明公开了一种hUCMSCSVF‑PEP@Gel的制备及用途，包括以下步骤：步骤一、hUCMSC的分离培养，步骤二、SVF的提取培养，步骤三、XhUCMSC、2XhUCMSCSVF悬液制备，步骤四、制备hUCMSC、hUCMSCSVF‑PEP@Gel，步骤五、多方位检测鉴定，本发明hUCMSC与PEP@Gel水凝胶共培养促进抗炎因子水平升高，加入SVF后具有协同增强抗炎作用，缓解了OA进程中氧化应激状态，从而逆转炎症状态；EP水凝胶作为hUCMSC传递的保护性载体，SVF和PEP水凝胶均有助于抑制炎性细胞因子的表达并诱导hUCMSC的软骨形成分化并具有协同作用，表明PEP@Gel水凝胶作为细胞传递的保护性载体在OA治疗中具有潜在的应用前景，hUCMSCSVF与PEP@Gel的联合应用有望更加高效的实现骨再生修复，适用于临床治疗骨关节炎中软骨再生。

主权项：1.一种hUCMSCSVF-PEP@Gel的制备，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、hUCMSC的分离培养：以组织块法培养P0hUCMSC，加入0.25％胰蛋白酶溶液和1mL抑肽酶溶液，消化，收获沉淀物、沉淀细胞，接种培养备用；步骤二、SVF的提取培养：将脂肪抽吸术得到的60ml脂肪组织以无菌PBS反复冲洗2-3遍至洗液清亮，加入等体积的0.075％I型胶原酶，置于37℃恒温摇床震荡消化约40分钟，以60目细胞筛过滤，收集滤液，400×g离心10分钟，吸除油脂层和乳状细胞层，在小心吸弃澄清上清，以0.9％氯化钠注射液重悬成6ml细胞悬液，即为SVF原液；步骤三、XhUCMSC、2XhUCMSCSVF悬液制备：取4×106ml的hUCMSC悬液5ml，加入5ml0.9％氯化钠注射液，制成2XhUCMSC备用；取4×106ml的hUCMSC悬液5ml，加入5mlSVF原液，制成2XhUCMSCSVF悬液含2×106mlhUCMSC备用；步骤四、制备hUCMSC、hUCMSCSVF-PEP@Gel：将50gPLGA1500-PEG1200-PLGA1500在4℃条件下使用低温涡旋搅拌均匀，分散溶解于100g纯水中，制成体积分数为50％的PEP@Gel，然后将纯水、2XhUCMSC或2XhUCMSCSVF悬液10ml分别加入到10ml质量分数50％的PEP@Gel中，混合均匀，制备成质量分数为25％的PEP@Gel，或含终浓度为1×106mlhUCMSC的hUCMSC-PEP@Gel和hUCMSCSVF-PEP@Gel，4-8℃条件下，将PEP@Gel、hUCMSC-PEP@Gel、hUCMSCSVF-PEP@Gel分别灌注至24孔板中，0.5ml孔，置于37℃促凝；步骤五、多方位检测鉴定：分别对hUCMSC-PEP@Gel、hUCMSCSV-PEP@Gel进行相变温度测定、hUCMSC存活情况检查、hUCMSC-PEP@Gel或hUCMSCSVF-PEP@GelⅡ型胶原沉积检查、hUCMSC-PEP@Gel或hUCMSCSVF-PEP@Gel的成骨、成脂、成软骨分化潜能分析、hUCMSC-PEP@Gel或hUCMSCSVF-PEP@Gel分泌效应。

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