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申请/专利权人：西部(重庆)科学城种质创制大科学中心
摘要：本发明涉及一种基于RNA感应的家蚕全基因组编辑文库筛选方法及应用，利用腺苷脱氨酶ADAR介导的RNA编辑将信号通路中markergene的检测和报告基因的翻译结合，通过报告基因的表达水平变化，实时监测markergene的表达情况，并对发生变化的家蚕细胞进行可视化和分选。本发明所述基于RNA感应的家蚕全基因组编辑文库筛选报告系统，可以直接检测、标记和筛选markergene发生变化的家蚕细胞，而不需要将任何外源DNA整合到宿主基因组中。该系统在家蚕中以简单、通用和可推广的方式发挥作用，将为家蚕的全基因组编辑及功能基因的高通量筛选奠定坚实基础，具有广泛的应用前景。
主权项：1.一种基于RNA感应的家蚕全基因组编辑文库筛选方法，其特征在于，将外源RNA感应系统导入家蚕细胞进行表达，所述外源RNA感应系统的基本结构如式1所示：式15’X-A-sesRNA-B-Y3’其中，X为内参基因Marker，A为自剪接肽1，sesRNA为含有UAG密码子的用于感应trgRNA存在的RNA序列，所述trgRNA由信号通路中的标志基因所编码，B为自剪接肽2，Y为报告基因Reporter；其中，内参基因的翻译不受RNA感应影响，自剪接肽用于释放内参基因和报告基因，正常情况下，sesRNA与trgRNA匹配并结合，招募ADAR使sesRNA中的UAG密码子变为UIG密码子，令报告基因正常翻译，而当trgRNA的表达水平受信号通路中其他基因缺失的影响时，能够正常与sesRNA匹配的量也随之改变，使报告基因的翻译水平发生相应的变化，因此，可通过检测报告基因的翻译情况对家蚕全基因组编辑文库进行筛选。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西部(重庆)科学城种质创制大科学中心 基于RNA感应的家蚕全基因组编辑文库筛选方法及应用
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