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申请/专利权人：中国农业科学院棉花研究所

摘要：本发明公开了一种评价基因编辑低酚棉花目标性状功能效率的方法，涉及农业生物育种领域中环境安全评价技术。评价方法包括试验材料的种植、溶液配制、样品采集、试样溶液制备、吸光度值测定、数据处理和目标性状功能效率评价。以基因编辑棉花的受体材料为对照品种，根据基因编辑棉花和对照品种的棉籽中棉酚含量水平，评价基因编辑低酚棉花的目标性状功能效率。该方法提供了基因编辑棉花目标性状功能效率评价的具体方法，有助于推动我国基因编辑作物安全评价的进程。

主权项：1.一种评价基因编辑低酚棉花目标性状功能效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：1试验材料的种植，具体为，在试验田种植对照品种和基因编辑低酚棉花，每个小区的面积30㎡以上，每个材料种3个以上小区，完全随机排列，棉花生长过程中的农事操作按常规管理进行；2溶液配制，具体为，将异丙醇和正已烷按照体积比为6:4的比例配制成异丙醇-正已烷混合溶液；量取约500mL异丙醇-正己烷混合溶液、2mL3-氨基-1-丙醇、8mL冰乙酸和50mL水于1000mL容量瓶中，再用异丙醇-正己烷混合溶液定容至刻度，得到溶剂A；3样品采集，具体为，棉花收获期，每小区随机采摘已经吐絮的棉花的棉籽，带回实验室进行棉酚含量测定；称取棉籽样品约200g，粉碎，过6.0mm分析筛，将筛上物棉绒和筛下物分别称重，将筛下物进一步研磨，全部过1.0mm分析筛，将筛上棉绒和粉碎后的棉籽仁壳试样分别装入密闭容器内，分别称取棉绒、棉籽壳、棉籽仁各1g，精确到0.0001g；试样置于250mL具塞三角瓶中，加入玻璃珠20粒，准确加入50mL溶剂A，于室温下120次min振荡提取1h。用滤纸过滤，过滤时在漏斗上加盖玻璃表面皿；弃去初滤液5mL，其余滤液全部收集至100mL具塞三角瓶，备用；棉籽试样应将棉绒和棉籽仁壳分别置于不同的三角瓶中，其余操作同上；4试样溶液制备，具体为，用移液管准确移取双等份滤液10mL，分别置于两个25mL棕色容量瓶a和b中；用异丙醇-正己烷混合溶液稀释a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定溶液的参比溶液；用移液管移取两份10mL的溶剂A分别至两个25mL棕色容量瓶a0和b0中；用异丙醇-正己烷混合溶液稀释a0至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定溶液的参比溶液；加2.0mL苯胺于b和b0中，沸水浴上加热30min后取出，冷却至室温，用异丙醇-正己烷混合溶液定容，摇匀，室温静置1h；5吸光度值测定，具体为，用1cm比色皿，于波长440nm处，用分光光度计以a0为参比溶液测定空白溶液b0的吸光度值A1，以a为参比溶液测定试样溶液b的吸光度值A2；6棉酚含量计算，具体为试样溶液的校正吸光度值A按照公式1计算：A＝A2-A11式中：A2——试样溶液的吸光度值；A1——空白溶液的吸光度值；样品中游离棉酚的含量以质量分数ω计，单位以毫克每千克mgkg表示，按公式2计算： 式中：A——试样溶液校正吸光度值；1250——样品稀释倍数；a——质量吸收系数，游离棉酚为62.5cm-1·g-1·L；m——试样质量，单位为克g；V——测定用滤液的体积，单位为毫升mL；l——比色皿光径长度，单位为厘米cm；棉籽样品中游离棉酚的含量由棉绒和棉籽仁壳的含量加权获得，按公式3计算： ω棉绒——棉绒试样中游离棉酚的含量，单位为毫克每千克mgkg；m棉绒——制备棉籽试样中棉绒的质量，单位为克g；ω棉绒仁壳—棉籽仁壳试样中游离棉酚的含量，单位为毫克每千克mgkg；m棉籽仁壳—制备棉籽试样中棉籽仁壳的质量，单位为克g。7目标性状功能效率评价，具体为，根据棉籽中棉酚含量，通过方差分析的方法判定基因编辑棉花的棉酚含量与受体品种的棉酚含量差异水平。

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百度查询： 中国农业科学院棉花研究所 一种评价基因编辑低酚棉花目标性状功能效率的方法