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申请/专利权人：温州医科大学;温州医科大学附属口腔医院
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种调控巨噬细胞极化的乳牙牙髓干细胞凋亡小体的制备方法及应用。本发明提供的一种乳牙牙髓干细胞凋亡小体的制备方法：步骤一、乳牙牙髓干细胞的分离培养、扩增；步骤二、乳牙牙髓干细胞凋亡小体的提取、鉴定；步骤三、乳牙牙髓干细胞凋亡小体对大鼠脊髓损伤治疗作用的评价。通过星形孢菌素诱导乳牙牙髓干细胞，差速离心获取更多的凋亡小体，诱导提取方案更加简便易行省时，且效率更高，对仪器的精度要求不高。通过本方法得到的一种乳牙牙髓干细胞凋亡小体可调控巨噬细胞极化，应用于制备治疗脊髓损伤疾病药物，为脊髓损伤疾病治疗提供一种新思路。
主权项：1.一种乳牙牙髓干细胞凋亡小体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：S1、乳牙牙髓干细胞的分离培养、扩增：获取脱落乳牙牙髓组织，分离培养乳牙牙髓干细胞，将乳牙牙髓干细胞用培养基进行培养扩增；S2、乳牙牙髓干细胞凋亡小体的提取、鉴定：配置星形孢菌素储备液，稀释储备液，诱导细胞凋亡，收集细胞培养上清液，差速离心，收集离心沉淀，得到乳牙牙髓干细胞凋亡小体，采用透射电子显微镜及动态光散射鉴定乳牙牙髓干细胞凋亡小体，并用免疫荧光染色法、蛋白质免疫印迹法、流式细胞仪分析验证乳牙牙髓干细胞凋亡小体；S3、乳牙牙髓干细胞凋亡小体对大鼠脊髓损伤治疗作用的评价：裂解乳牙牙髓干细胞凋亡小体蛋白，测定其蛋白浓度，利用脊髓打击器构建大鼠脊柱第十胸椎水平的脊髓损伤模型，采用尾静脉注射法定量给药，进行乳牙牙髓干细胞凋亡小体对大鼠脊髓损伤治疗作用的评价。
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