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一种CAR-间充质干细胞外泌体及其制备方法和应用 

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申请/专利权人:广东壹加再生医学研究院有限公司

摘要:本发明提供了一种CAR‑间充质干细胞外泌体及其制备方法和应用,属于肿瘤免疫治疗药物技术领域。本发明以人E钙粘蛋白ECAD为靶点,用包含CAR核苷酸序列的质粒包装重组慢病毒,然后用重组慢病毒感染间充质干细胞,获得CAR‑间充质干细胞。然后将CAR‑间充质干细胞以特异性的抗原活化产生外泌体后,进一步分离、富集、纯化,最终得到CAR‑间充质干细胞外泌体。本发明制备的CAR‑间充质干细胞具有抑制CRS的能力,CAR‑间充质干细胞外泌体能够抑制乳腺癌细胞和血管内皮细胞增殖,进而发挥抗乳腺肿瘤的作用,为乳腺癌的治疗提供了新的策略。

主权项:1.一种CAR-间充质干细胞外泌体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1.制备CAR-间充质干细胞,所述CAR-间充质干细胞包含CAR核苷酸序列,所述编码CAR核苷酸序列编码靶向ECAD蛋白的嵌合抗原受体;所述CAR核苷酸序列包含单链可变片段,还包括CD28或TLR4信号转导域;S2.将CAR-间充质干细胞置于培养基中培养,所述培养基含有磁珠偶联的ECAD蛋白;S3.收集S2的培养上清液,进行梯度离心,梯度离心后取沉淀;S4.将S3获得的沉淀重悬后与磁珠混合,进行孵育,然后置于磁场中,弃上清,再次重悬,将重悬液加入磁珠分选柱,用缓冲液对分选柱进行第一洗脱,待无抗原结合能力的外泌体囊泡冲洗下来后,将分选柱移出磁场,对洗脱液进行第二洗脱,收集第二洗脱后的洗脱液,获得CAR-间充质干细胞外泌体。

全文数据:

权利要求:

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