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申请/专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所

摘要：本发明公开了一种生产7‑氨基去乙酰氧基头孢烷酸的方法。该方法包括如下步骤：向酿酒酵母BY4741中导入SEQIDNo：3所示的pcbCsc基因、SEQIDNo：6所示的penDEen、SEQIDNo.12所示的cefEsc9skl、Symbiodiniummicroadriaticum来源的pcbAB基因和Aspergillusnidulans来源的npgA基因，从而获得用于生产7‑ADCA的工程菌；发酵培养工程菌，收集发酵菌体；破碎发酵菌体，离心，收集菌体破碎后的上清液；菌体破碎后的上清液中含有7‑ADCA。本发明制备的重组酿酒酵母DM282的菌体破碎后上清液中7‑ADCA的产量达到2.28mgg。本发明具有重要的应用价值。

主权项：1.制备用于生产7-ADCA的工程菌的方法，包括如下步骤：提高酵母中异青霉素N合酶、酰基辅酶A:6-氨基青霉烷酸酰基转移酶和脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶的表达量和或活性，同时导入Symbiodiniummicroadriaticum来源的pcbAB基因和Aspergillusnidulans来源的npgA基因，从而获得用于生产7-ADCA的工程菌；所述异青霉素N合酶为如下a1）或a2）：a1）氨基酸序列是SEQIDNO：13所示的蛋白质；a2）在SEQIDNO：13所示的蛋白质的N端或和C端连接标签得到的融合蛋白质或者整合上细胞器的锚定序列；所述酰基辅酶A:6-氨基青霉烷酸酰基转移酶为如下b1）或b2）：b1）氨基酸序列是SEQIDNO：14所示的蛋白质；b2）在SEQIDNO：14所示的蛋白质的N端或和C端连接标签得到的融合蛋白质或者整合上细胞器的锚定序列；所述脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶为如下c1）或c2）或c3）：c1）氨基酸序列是SEQIDNO：15所示的蛋白质；c2）氨基酸序列是SEQIDNO：2所示的蛋白质；c3）在SEQIDNO：15或SEQIDNO：2所示的蛋白质的N端或和C端连接标签得到的融合蛋白质或者整合上细胞器的锚定序列；所述异青霉素N合酶的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo：3所示；所述酰基辅酶A:6-氨基青霉烷酸酰基转移酶的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo：6所示；所述脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo.12或SEQIDNo：1所示；所述酵母为酿酒酵母BY4741。

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权利要求：

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