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申请/专利权人：温州医科大学附属第二医院(温州医科大学附属育英儿童医院)

摘要：本发明公开了一种外周神经病理性疼痛中枢治疗的判断应用，本发明的有益效果是：对于神经病理性疼痛neuropathicpain，NP动物病理损伤来说，脑区终纹床核bednucleiofthestriaterminals，BNST功能与雄性大鼠外周NP的调节有关，而在外周热痛刺激可以引起BNST腺苷水平明显变化，外周机械刺激未引起，并且全身给予神经类固醇黄体酮progesterone，PROG治疗外周NP时，通过调控BNST的细胞外‑5’‑核苷酸酶ecto‑5’nucleotidase，CD73‑腺苷‑A1腺苷受体Aladenosinereceptor，A1AR腺苷信号通路，可以促进NP康复，改善机械性缩足阈值mechanicalwithdrawalThreshold，MWT和热缩足反射潜伏期thermalwithdrawalLatency，TWL，并且与该脑区腺苷水平负相关，与A1AR含量变化正相关，调控BNST的CD73‑腺苷‑A1AR腺苷信号通路作为新的一种外周NP动物模型中枢治疗机制。

主权项：1.一种外周神经病理性疼痛中枢治疗的判断应用，其特征在于，包括以下步骤方法：S1、饲养48只180-220g健康未交配雄性SD大鼠随机分八组；S2、假手术对照神经元型腺苷探针ShamNeuado+CON组、坐骨神经结扎chronicconstrictioninjury，CCI模型神经元型腺苷探针CCINeuado+VEH组、A1AR拮抗剂DPCPX神经元型腺苷探针CCINeuado+PROG+DPCPX组、PROG治疗神经元型腺苷探针CCINeuado+PROG组，以及假手术对照星形胶质细胞型腺苷探针组ShamAstado+CON组、模型星形胶质细胞型腺苷探针CCIAstado+VEH组、A1AR拮抗剂星形胶质细胞型腺苷探针CCIAstado+PROG+DPCPX组、PROG治疗星形胶质细胞型腺苷探针CCIAstado+PROG组；S3、测定大鼠MWT和TWL的基础值；S4、麻醉大鼠后，前四组在BNST注射神经元型腺苷探针rAAV-hSyn-Ado_B10-WPRE-hGHpA，后四组在BNST注射星胶型腺苷探针rAAV-GfaABC1D-Ado_B10，立体定位注射坐标为：前囟后AP-0.15，中线旁开ML±2.65，距顶部硬脑膜深度DV-5.85mm；同时进行大鼠右后肢CCI；S5、从结扎后第14天开始连续两周给药，每日一次，前后各四组大鼠分别腹腔给予溶剂、溶剂、DPCPX2mg·kg-1提前半小时注射+PROG12mg·kg-1、PROG12mg·kg-1，在结扎第3周时，进行BNST埋置光纤；S6、在腺苷探针表达四周、坐骨神经结扎28天即给药两周后，先测定各组MWT和TWL；再使用光纤记录系统采集各组动物在受到机械刺激或热刺激时BNST脑区内的腺苷信号变化；S7、每组1只大鼠4％多聚甲醛灌注固定，取脑进行冠状冰冻切片，镜下观察腺苷探针表达区域和光纤置入位置，每组另1只大鼠麻醉后即刻取脑，震荡切片，进行膜片钳检测，电生理记录BNST腺苷探针转染细胞的放电类型神经元型探针的四组动物及IV曲线星胶型探针的四组动物；S8、每组4只大鼠深麻醉后断头取脑，切取BNST新鲜脑组织，液氮速冻，以备进行westernblot检测用。S9、利用以上描述方法以及实验数据进行CCI模型动物表达腺苷探针、痛觉刺激时腺苷信号的监测以及行为学测定后的取材检测。

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