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申请/专利权人：重庆医科大学国际体外诊断研究院

摘要：本发明公开了一种高灵敏的尿液多巴胺电化学检测方法。本发明采用磁性分子印迹技术对尿液进行样本预处理，从样品中分离出目标物多巴胺。将氧化石墨烯Grapheneoxide，GO分散液与三水合氯金III酸HydrogentetrachloroaurateIIItrihydrate，HAuCl4·3H2O按一定比例混合配制成GO‑HAuCl4悬浮液后滴加至丝网印刷碳电极Screenprintedcarbonelectrode，SPCE表面。采用循环伏安法Cyclicvoltammetry，CV扫描将其进行还原，制备得还原氧化石墨烯RGO和金纳米粒子AuNPs共同修饰的丝网印刷碳电极RGO‑AuNPsSPCE，采用差分脉冲伏安法对预处理后的样本进行检测，根据电化学响应所得峰电流强度与多巴胺浓度间的线性关系，实现其定量测定。该发明所建立的多巴胺电化学检测方法能为临床或实验室尿液多巴胺的检测提供一种特异、准确的新方法。

主权项：1.一种采用磁性分子印迹聚合物对尿液样本进行预处理的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：1磁性分子印迹聚合物的制备：称取100.0mg四氧化三铁Fe3O4，100.0nm，加入锥形瓶中；随后，使用加样器依次向其中加入4.0mL乙醇，4.0mL超纯水，8.0mL3-异丁烯酰氧丙基三甲氧基硅烷3-methacryloxypropyltrimethoxysilane,MPS，涡旋2.0min；之后，将锥形瓶置于40.0℃摇床，250.0rpm反应12.0h，合成MPS磁珠；称取76.0mg多巴胺Dopamine,DA加入50.0mL离心管中，随后加入2.0mL超纯水，涡旋至DA完全溶解后加入18.0mL乙腈，最后加入171.2μL甲基丙烯酸Methacrylicacid,MAA，超声15.0min，室温静置12.0h进行预聚合反应；使用磁力架收集反应后的MPS磁珠，弃去上清液；向锥形瓶中加入10.0mL乙腈清洗MPS磁珠3次后，再加入已制备好的预聚合溶液；再向锥形瓶中加入769.8μL二甲基丙烯酸乙二醇酯Ethyleneglycoldimethacrylate,EGDMA，最后称取20.0mg偶氮二异丁腈Azobisisobutyronitrile,AIBN加入锥形瓶中，涡旋2.0min；放入已预热的60.0℃摇床中，250.0rpm反应24.0h；待反应完成后，使用磁力架收集磁性分子印迹聚合物Magneticmolecularlyimprintedpolymer,MMIP，弃去上清液；随后，用10％醋酸溶液清洗MMIP，放置于90.0℃水浴箱中，清洗四天，每12.0h更换一次醋酸溶液；最后，用磁力架吸附MMIP，弃去上清液，用超纯水清洗2～3遍，弃去上清液，于60.0℃干燥后备用；2尿液样本的预处理：向400μL尿液样本中加入20.0mgMMIP，室温静置8.0min，磁吸附分离后弃去上清液；再加入1.0mL超纯水去除多余的尿液基质，涡旋30.0s，弃上清；随后，向加标尿液样本中加入800.0μL醋酸溶液，放入已预热好的30.0℃水浴箱中，静置8.0min，磁分离后收集上清液，用氮吹仪将上清液吹干；最后，使用200.0μL检测缓冲液复溶吹干后的产物。

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