买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：中国医科大学附属第一医院

摘要：本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种人体液真菌检测试纸及其制备方法，所述检测试纸包括PVC底板、样品垫、荧光垫、反应膜和吸水垫。其中，荧光垫上包被有荧光微球标记的抗体；反应膜上设有检测线和质控线，检测线上包被有1‑3‑β‑D葡聚糖‑牛血清白蛋白偶联物，质控线上包被羊抗鼠IgG二抗。本发明的试纸条能够快速检测1‑3‑β‑D葡聚糖，且灵敏度高，准确性好，重复性和稳定性强。

主权项：1.一种人体液真菌检测试纸，其特征在于，包括PVC底板、样品垫、荧光垫、反应膜和吸水垫；所述样品垫的制备方法，包括以下步骤：1将乙二醇甲醚加热至160℃，滴加由N-乙烯基吡咯烷酮、N,N-二甲基丙烯酰胺、过氧化二叔丁基组成的混合液，滴加完成后保温，降温至70℃，搅拌，得到聚乙烯吡咯烷酮共聚物；2向步骤1所得聚乙烯吡咯烷酮共聚物中加入N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶，搅拌，加入菊粉，继续搅拌，透析，离心，上清液冷冻干燥，得到复合聚合物；3向PBS缓冲液中加入步骤2所得复合聚合物、酪蛋白和Tween-20混合均匀，得到处理液A；4将玻璃纤维膜在步骤3所得处理液A中浸泡后烘干，得到样品垫；所述荧光垫的制备方法，包括以下步骤：a将荧光微球与MES缓冲液混合，超声，离心去上清液，重新加入MES缓冲液，超声，得到荧光微球混合液；b使用MES缓冲液分别配制NHS溶液和EDAC溶液，滴加到步骤a所述荧光微球混合液中，至NHS和EDAC终浓度为0.8mgmL和0.3mgmL，超声，37℃避光反应1h，得到混合液A；c将步骤b所述混合液A离心，洗涤沉淀，加入真菌1-3-β-D葡聚糖抗体溶液，超声，避光反应，加入牛血清白蛋白溶液，超声1min，避光旋转，离心得到微球抗体偶联物沉淀；d将海藻糖、乙二酸酐溶于乙腈中，加入NaOH，搅拌，减压浓缩，在乙醇和乙醚混合液中重结晶，得到羧化海藻糖；将抗坏血酸溶于二氯甲烷中，0℃下加入二氯亚砜，25℃搅拌，减压浓缩，洗涤，干燥，将干燥后产物溶于1wt%乙酸溶液中，加入3,4-二羟基苯甲醛，搅拌，加入硼氢化钠继续搅拌，抽滤，得滤饼；将滤饼与羧化海藻糖以及去离子水混合均匀，得到混合液B，加入3molL的盐酸溶液和蒸馏水，混合均匀后在搅拌，离心，上清液过滤，冷冻干燥，得到海藻糖-抗坏血酸改性复合物；e向HEPES缓冲溶液中加入步骤d所得海藻糖-抗坏血酸改性复合物、甘氨酸和二硫苏糖醇混合均匀，得到偶联物复溶储存液；将步骤c所得微球抗体偶联物沉淀用PBS缓冲液清洗，加入偶联物复溶储存液中重悬混匀，得到微球-抗体液；f向4%wv的牛血清白蛋白溶液中加入葡萄糖和硼砂得到处理液B，将聚酯膜在处理液B中浸泡后烘干，得到预处理聚酯膜；g将步骤e制得的微球-抗体液用PBS缓冲液稀释，喷涂于步骤f所得预处理聚酯膜上，烘干，得到荧光垫；所述反应膜的制备方法，包括以下步骤：i将1-3-β-D葡聚糖与去离子水混合均匀，得到20mgL的葡聚糖溶液，取葡聚糖溶液加入10wt%的过氧化氢溶液中，搅拌，加入二甘醇，继续搅拌，超滤，冷冻干燥，得到氧化葡聚糖；ii将等体积磷酸缓冲液与醋酸缓冲液混合均匀得到混合缓冲液，将BSA和步骤i所得氧化葡聚糖加入混合缓冲液中，4℃反应，离心，取上清液透析，得到1-3-β-D葡聚糖-BSA偶联物；iii向去离子水中加入步骤2所得复合聚合物和氯化钠，得到处理液C，将硝酸纤维素膜在处理液C中浸泡后烘干，得到预处理反应膜；iv用PBS将1-3-β-D葡聚糖-BSA偶联物稀释至0.33mgmL，将羊抗鼠IgG稀释至0.5mgmL，喷于步骤iii所述预处理反应膜上划线，分别作为检测线和质控线，烘干，得到反应膜。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国医科大学附属第一医院 一种人体液真菌检测试纸及其制备方法