买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：北京赛维森国际生物科技有限公司

摘要：本发明属于原蛋白生物合成技术领域，具体涉及一种基于诱导多能干细胞技术的胶原蛋白生物合成方法，所述包括胶原蛋白生物合成方法具体包括以下步骤：步骤1.细胞重编程：从供体的皮肤或血液中提取体细胞，包括成纤维细胞及血细胞，使用病毒载体或非病毒方法将重编程因子导入体细胞，所述病毒载体为逆转录病毒或腺相关病毒。该发明能够利用供体细胞合成胶原蛋白，避免免疫排斥，实现个性化医疗，减少伦理争议，优化培养和基因调控提高合成效率和质量，严格质量控制确保遗传稳定性和多能性，能测试评估生物活性和机械性能，多种提取纯化技术确保高纯度，质量检测确保符合天然标准。

主权项：1.一种基于诱导多能干细胞技术的胶原蛋白生物合成方法，其特征在于：所述包括胶原蛋白生物合成方法具体包括以下步骤：步骤1.细胞重编程：从供体的皮肤或血液中提取体细胞，包括成纤维细胞及血细胞，使用病毒载体或非病毒方法将重编程因子导入体细胞，所述病毒载体为逆转录病毒或腺相关病毒，所述重编程因子包括Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc，在适当的培养基和条件下，体细胞重编程为iPSCs，iPSCs形成特征性的细胞集落；步骤2.iPSCs培养与扩增：使用含有KOSR、bFGF的特定培养基，维持iPSCs的生长和多能性，采用无饲养层培养基或使用细胞外基质蛋白涂层的培养板，定期传代培养iPSCs；步骤3.细胞鉴定与质量控制：使用免疫荧光、流式细胞术或qPCR检测iPSCs的多能性标志物，通过核型分析和全基因组测序，确认iPSCs的遗传稳定性，通过体外分化实验或体内成瘤实验，评估iPSCs的多能性；步骤4.定向分化：使用特定的分化培养基和生长因子诱导iPSCs分化为成纤维细胞或其他合成胶原蛋白的细胞类型，通过调整培养基成分、细胞密度、培养温度和氧浓度，优化分化条件，使用免疫荧光和qPCR检测成纤维细胞的分化标志物；步骤5.胶原蛋白合成与分泌：调整培养基成分，氨基酸、维生素C、氧浓度和机械应力，通过基因编辑技术或小分子化合物，调控胶原蛋白合成相关基因的表达，定期采集培养基样本，使用ELISA或WesternBlot检测胶原蛋白的分泌情况；步骤6.功能测试与优化：评估分化后的成纤维细胞的生物学功能，包括细胞增殖、迁移、胶原纤维形成能力，使用CRISPRCas9技术，对胶原蛋白合成相关基因进行定向编辑，通过拉伸试验、剪切试验，评估合成的胶原蛋白纤维的力学性能；步骤7.胶原蛋白的提取和纯化：从培养基中收集分泌的胶原蛋白，采用酸溶、盐析或酶解方法提取胶原蛋白，使用离心、透析、凝胶过滤层析、离子交换层析技术纯化胶原蛋白，去除杂质，通过SDS-PAGE、电泳、质谱检测纯化胶原蛋白的纯度和分子量；步骤8.质量检测：使用红外光谱、圆二色谱分析胶原蛋白的二级结构，测定胶原蛋白的氨基酸组成，确认其氨基酸序列与天然胶原蛋白的一致性，通过细胞培养实验，评估胶原蛋白对细胞粘附、增殖和分化的影响。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京赛维森国际生物科技有限公司 一种基于诱导多能干细胞技术的胶原蛋白生物合成方法