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申请/专利权人：中国计量科学研究院
摘要：本发明公开了一种G9P8轮状病毒假病毒标准物质及其制备方法和应用，其制备方法包括以下步骤：1G9P8轮状病毒假病毒颗粒的制备；2G9P8轮状病毒假病毒颗粒的提取纯化；3G9P8轮状病毒假病毒均匀性与稳定性分析；4G9P8轮状病毒假病毒标准物质的定值及不确定度分析。本发明制备方法将假病毒构建与反转录‑数字PCR方法相结合，构建了包含VP7和VP4RNA完整序列的假病毒颗粒，研制了具有确定量值的假病毒标准物质，标准物质在‑80℃可稳定保存6个月。本发明方法可以对轮状病毒G9P8假病毒核酸标准物质中VP7和VP4的RNA进行绝对定量，确保了标准物质量值的准确性。
主权项：1.一种G9P8轮状病毒假病毒标准物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1G9P8轮状病毒假病毒颗粒的制备1慢病毒载体构建所述慢病毒载体包含VP4和VP7的编码基因，分别为GenBank:MH182439.1和GenBank:MH182443.1；其中，VP4基因序列位于VP7基因序列的N端；2将293A细胞接种于6孔板，放置于37℃，5％的CO2培养箱中培养至细胞覆盖培养皿80％-90％；3A液：将构建的含VP4和VP7的编码基因的慢病毒载体溶于500μLDMEM液体培养基中，震荡混匀；4B液：将PEI溶液溶于500μLDMEM液体培养基中，震荡混匀；5静置5min，将A液与B液混合均匀得C液；6将C液在37℃培养箱中避光放置15min；7将C液均匀加入细胞培养基中，轻晃摇匀；8用上述培养基给细胞换液，于CO2培养箱中37℃培养4h后换液；9继续培养48h后收集细胞；2G9P8轮状病毒假病毒颗粒的提取纯化；3假病毒标准物质的稀释与保存；4G9P8轮状病毒假病毒均匀性与稳定性分析；5G9P8轮状病毒假病毒标准物质的定值及不确定度分析。
全文数据：
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百度查询： 中国计量科学研究院 一种G9P8轮状病毒假病毒标准物质及其制备方法和应用
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