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申请/专利权人：南方医科大学南方医院
摘要：本发明公开了一种高效表达β‑葡萄糖苷酶的基因工程菌及其应用，涉及生物工程技术领域。本发明基于CRISPRCas9介导的基因编辑技术，通过引物设计合成了pTargetF‑bGC质粒，通过pTargetF‑bGC质粒将β‑葡萄糖苷酶基因整合入E.coliNissle1917的基因组，构建一种全新的基因工程菌，该工程菌实现了β‑葡萄糖苷酶的高效表达，将该基因工程菌应用于类风湿关节炎的治疗中，能够提高活性分子的生物利用度、降低治疗成本、减少药物副作用，为类风湿关节炎的治疗提供一种新的途径，具有很好的应用前景。
主权项：1.一种表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1设计引物扩增β-葡萄糖苷酶基因；2分别设计引物从大肠杆菌基因组克隆启动子nirB基因、attλ位点的上游同源臂和下游同源臂；3设计引物从pTargetF质粒克隆gRNA序列；4使用引物对pTargetF质粒进行线性化；5将所述gRNA、attλ位点上游同源臂、启动子nirB基因、β-葡萄糖苷酶基因和attλ位点下游同源臂通过同源重组依次构建到所述线性化的pTargetF质粒骨架，得重组质粒pTargetF-bGC；6将pCas质粒转入大肠杆菌感受态细胞，得成功整合pCas质粒的感受态细胞；再将重组质粒pTargetF-bGC转入成功整合pCas质粒的感受态细胞，得所述表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南方医科大学南方医院 一种高效表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌及其应用
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