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申请/专利权人:江苏凯基生物技术股份有限公司
摘要:本发明公开一种用于检测细胞培养过程中支原体污染的试剂组合物,其包括A组分和B组分,其中,A组分包括Tricine、MgSO4、MgCO34MgOH2·5H2O、萤火虫荧光素酶、D‑荧光素钾盐、TritonX‑100、BSA、EDTA、DTT;B组分包括Tricine、MgSO4、EDTA、DTT、ADP。本发明提出的试剂组合物可以检测细胞培养过程中的支原体污染,可以提高检测效率,操作简单,实用性强,可适用于细胞培养上清液样本的支原体检测,检测结果准确。
主权项:1.一种检测细胞培养过程中支原体污染的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将待检测样品加入黑色96孔检测板中;(2)加入组分I,吹打均匀,过程中避免产生气泡,15分钟后检测荧光值,记为A;(3)加入组分II,吹打均匀,过程中避免产生气泡,5分钟后检测荧光值,记为B;(4)通过计算B与A的比值来判断是否有支原体污染;当BA1时,表明细胞有支原体污染;当BA1时,表明细胞无支原体污染;当BA的值在1±0.1范围内时,为保证结果的准确性,应将细胞继续培养48小时后进行重复实验;所述组分I和组分II组成试剂组合物;所述I组分包含如下组分:Tricine20mM;MgSO42.6mM;MgCO34MgOH2·5H2O1.2mM;萤火虫荧光素酶0.03mM;D-荧光素钾盐157mM;TritonX-1001.5wt%;BSA1.5mgml;EDTA0.1mM;二硫基苏糖醇(DTT)或巯基乙醇10-50mM;组分II包含如下组分:Tricine10-50mM;MgSO42.6mM;EDTA0.1mM;DTT33.3mM;ADP0.58mM。
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