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申请/专利权人：温州医科大学附属第一医院
摘要：本发明公开了一种用于规模化提取经过基因编辑后具有氨苄青霉素抗性以及能够分泌bFGF蛋白的大肠杆菌所分泌的细胞外膜囊泡（简称OMVFGF2）的方法，该方法在含有100ugmL氨苄青霉素的LB液体中培养大肠杆菌，并利用超声分离和过滤技术，从大肠杆菌中有效分离出不含大肠杆菌菌体的负载bFGF蛋白的细胞外膜囊泡。提取方法操作简便易行，在保留细菌外膜囊泡大部分有效生物成分的前提下，极大提高了细胞外膜囊泡的产量。同时，该方法有效的去除了大肠杆菌活菌菌体，保证了对机体的安全性，极大减少了因微生物入血而诱发菌血症或坏血症的风险。此外，将利用该方法提取的OMVFGF2应用于结肠炎创面，发现其能够显著促进结肠炎创面的愈合。
主权项：1.一种治疗炎症性肠炎的大肠杆菌分泌的细菌外膜囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：大肠杆菌的复苏与培养：用含100ugmL氨苄青霉素的无菌LB培养基培养大肠杆菌，将置于培养管中的大肠杆菌置于37℃细菌培养箱中以200rpm摇床培养24h，多次传代培养至细菌性状稳定；S2：大肠杆菌的接种与扩大培养：将步骤S1中获得的性状稳定的大肠杆菌接种于含100ugmL氨苄青霉素的无菌的LB培养基中，置于37℃细菌培养箱中以200rpm摇床培养24h；S3：获得大肠杆菌的细菌外膜囊泡：收集步骤S2中培养完成的细菌悬液，经过超声清洗机超声20min后在4℃以6000g的转速离心20分钟，然后取上清液再次在4℃中以6000g的转速离心20分钟，收集离心完成的上清液，经孔径为0.45um的针头式过滤器过滤并分离大肠杆菌，除菌后，将过滤液用100kDA的超滤管离心超滤，收集超滤管管芯内的液体，得到无大肠杆菌活菌菌体的大肠杆菌细菌外膜囊泡生物滤液，即大肠杆菌的细菌外膜囊泡；S4：获得无菌的FGF工程化细菌外膜囊泡：将步骤S3中获得的生物滤液在4℃以150000g的转速离心2小时，去除上清液后用PBS重悬沉淀，再次以4℃以150000g的转速离心2小时，去除上清液后用PBS重悬沉淀，所得重悬液即为无菌的FGF工程化细菌外膜囊泡。
全文数据：
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