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申请/专利权人：呈诺再生医学科技(北京)有限公司

摘要：本发明公开了一种诱导iPSC分化获得血小板的方法，采用本发明提供的方法，1个iPSC可以获得1500到3000个巨核祖细胞，相较于目前的20‑50个的结果，产量显著提高，1个iPSC最终可获得15000‑30000个血小板，克服了现有技术面临的iPSC向巨核细胞和或血小板分化的分化效率低下这一技术问题，为大规模生产用于生物医学和临床治疗的功能性血小板奠定了基础，临床应用前景广阔。

主权项：1.一种用于诱导iPSC分化获得巨核细胞和或血小板的培养体系，其特征在于，所述培养体系包括iPSC分化形成拟胚体培养基、拟胚体向中胚层分化培养基、中胚层向生血内皮细胞分化培养基、生血内皮细胞向髓系祖细胞分化培养基、髓系祖细胞分化形成巨核祖细胞培养基、巨核祖细胞分化形成成熟巨核细胞培养基、和或巨核细胞分化形成血小板培养基；优选地，所述iPSC分化形成拟胚体培养基包含基础培养基、ROCK通路抑制剂、PVA；优选地，所述拟胚体向中胚层分化培养基包含基础培养基、GSK3β抑制剂；优选地，所述中胚层向生血内皮细胞分化培养基包含M1培养基、M2培养基；优选地，所述生血内皮细胞向髓系祖细胞分化培养基包含M3培养基；优选地，所述髓系祖细胞分化形成巨核祖细胞培养基包含M4培养基；优选地，所述巨核祖细胞分化形成成熟巨核细胞培养基包含M5培养基；优选地，所述巨核细胞分化形成血小板培养基包含M6培养基；更优选地，所述iPSC分化形成拟胚体培养基中的基础培养基包括E8培养基、完全培养基、StemSpanTMSFEMHematopoieticCellCultureMedium、StemPro-34、II、STEMdiffTMAPELTM2Medium、和或BPEL；更优选地，所述ROCK通路抑制剂包括Y-27632、Thiazovivin、FasudilHCl、GSK429286A、RKI-1447、和或Azaindole1；最优选地，所述iPSC分化形成拟胚体培养基中的基础培养基为E8培养基、完全培养基；最优选地，所述ROCK通路抑制剂为Y-27632；最优选地，所述iPSC分化形成拟胚体培养基为含有Y-27632的E8培养基、含有PVA的完全培养基；更优选地，所述拟胚体向中胚层分化培养基中的基础培养基包括E8培养基、完全培养基、StemSpanTMSFEMHematopoieticCellCultureMedium、StemPro-34、II、STEMdiffTMAPELTM2Medium、和或BPEL；更优选地，所述GSK3β抑制剂包括Chir99021、SB216763、CHIR-98014、TWS119、Tideglusib、和或SB415286；最优选地，所述拟胚体向中胚层分化培养基中的基础培养基为E8培养基；最优选地，所述GSK3β抑制剂为Chir99021；最优选地，所述拟胚体向中胚层分化培养基为含Chir99021的E8完全培养基；优选地，所述中胚层向生血内皮细胞分化培养基中的M1培养基包含STEMdiffTMAPELTM2Medium或DMEMF12、IMDM、L-谷氨酰胺、抗坏血酸、硫代甘油、PFHMII、BSA或HSA、1×Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine、BMP4、VEGF、bFGF；优选地，所述中胚层向生血内皮细胞分化培养基中的M2培养基包含M1培养基、TGF-βI型受体ALK5，ALK4和ALK7的抑制剂；更优选地，所述TGF-βI型受体ALK5，ALK4和ALK7的抑制剂包括SB431542、Galunisertib、LY2109761、SB525334、SB505124、和或GW788388；最优选地，所述TGF-βI型受体ALK5，ALK4和ALK7的抑制剂为SB431542；优选地，所述生血内皮细胞向髓系祖细胞分化培养基中的M3培养基包含APEL或DMEMF12、IMDM、L-谷氨酰胺、抗坏血酸、硫代甘油、PFHMII、BSA或HSA、1×Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine、β-巯基乙醇、VEGF、bFGF、SCF、IL-3、TPO、IL-6、IL-11；优选地，所述髓系祖细胞分化形成巨核祖细胞培养基中的M4培养基包含StemSpanTMSFEMHematopoieticCellCultureMedium或STEMdiffTMAPELTM2Medium或DMEMF12、IMDM、L-谷氨酰胺、抗坏血酸、硫代甘油、PFHMII、BSA或HSA、1×Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine、IL-6、IL-11、SCF、肝素钠、TPO或TA316；优选地，所述巨核祖细胞分化形成成熟巨核细胞培养基中的M5培养基包含IMDM、血清、L-谷氨酰胺、抗坏血酸、1×Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine、硫代甘油、SCF、TA316或TPO、GM6001、SR1、Y-27632、--Blebbistatin；更优选地，所述血清包括FBS、KSR、HSA、和或HPL；最优选地，所述血清为FBS；优选地，所述巨核细胞分化形成血小板培养基中的M6培养基包含IMDM、血清、L-谷氨酰胺、抗坏血酸、1×Insulin-Transferrin-Selenium-Ethanolamine、硫代甘油、SCF、TA316或TPO、GM6001、SR1、Y-27632；更优选地，所述血清包括FBS、KSR、HSA、和或HPL；最优选地，所述血清为FBS。

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