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申请/专利权人：吉林大学

摘要：本发明适用于医学检测技术领域，提供了一种基于荧光氧化产物检测氧化损伤的方法，包括以下步骤：样本血浆荧光强度检测；标准对照品对照。标准对照品对照方案以浓度为3.0‑6.0μgmL硫酸奎宁溶液为标准对照品，结合酶标仪对两个波段的血浆的氧化损伤产物水平进行了检测，包含FlOP_360：激发发射波长为360420nm和FlOP_400：激发发射波长为400475nm，具有高度可靠性和稳定性。本发明有助于研发价格低廉、特异性高且适用范围广的FlOPs规范化快速检测试剂盒，且有助于筛选氧化损伤水平异常的人群并给予相应建议，降低人群中氧化损伤相关疾病的风险。

主权项：1.一种基于荧光氧化产物检测氧化损伤的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1、样本血浆荧光强度检测；具体包括以下步骤：步骤S11、解冻降温：离心提取血液样本，获得血浆样本，使用时将预冷冻的血浆样本在4℃冰箱中解冻或将新采集的离心后血浆样本降温至4℃冰箱；步骤S12、配置萃取剂：使用无水乙醇和乙醚按3:1体积比配置；步骤S13、配置血浆与萃取剂：按1:20体积比混合血浆和萃取剂，配制三管，每管溶液量为1300μL；步骤S14、样本处理：将EP管置于震荡仪上进行震荡，之后将EP管进行离心，完成离心后，将EP管中的上清液转移至新的EP管中，再次进行离心；步骤S15、检测：将三组平行配比下的溶液分别放到三个康宁板中进行测量，每个EP管溶液滴三个孔，放入酶标仪中进行检测；酶标仪的参数设置包括：荧光测量，激发波长分别为360nm和400nm，对应的发射波长分别为420nm和475nm；波长分别对应两种FlOP产物即FlOP_360和FlOP_400；步骤S16、计算：求出三个康宁板的同一体积比下的荧光强度平均值，获得待测血浆样本的荧光强度；步骤S2、标准对照品对照；具体包括以下步骤：步骤S21、制备1000mL0.05molL的H2SO4溶液；步骤S22、制备3.0-6.0μgmL硫酸奎宁溶液，作为标准对照品；步骤S23、配置萃取剂：使用无水乙醇和乙醚按3:1体积比配置；步骤S24、分别按1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:50体积比配制标准对照品和萃取剂并置于EP管中，每管内溶液量为1300μL；步骤S25、执行与步骤S14-S15相同的操作直至荧光检测后得到荧光强度度值，求出荧光强度平均值后绘制标准曲线，得出回归方程式；标准曲线以标准物的浓度为横坐标，荧光强度值为纵坐标；步骤S26、将步骤S1获得的样本荧光强度代入标准曲线回归方程式中，得出相应浓度；结合稀释倍数和相应系数进行后续浓度计算，最后样本FlOP浓度的单位为μg硫酸奎宁的等同荧光强度ml，简称为μgmL；如果血浆样本的荧光强度不在标准曲线最佳范围，则使用恒定系数调整样本的荧光强度到相应范围进行浓度计算。

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