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申请/专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所

摘要：本发明应用定向进化技术和方法对来源于红球菌属RhodococcuserythropolisDCL14的柠檬烯环氧水解酶LEH进行酶改造，获得了对以4‑环氧乙烷‑2‑基‑1‑丁醇为代表的环氧醇类有酶活的一系列突变体，该突变体可高效不对称催化4‑环氧乙烷‑2‑基‑1‑丁醇生成S‑四氢‑2H‑吡喃‑2‑基甲醇，同时突变体也可以催化2‑3‑苯基氧杂环丁烷‑3‑基乙醇合成S‑3‑苯基四氢呋喃‑3‑基甲醇，该方法具有产率高、ee值高、辅酶使用量少、不需额外添加如葡萄糖脱氢酶等用以辅因子循环的酶、反应条件温和、操作简单等优点。

主权项：1.一种柠檬烯环氧水解酶LEH突变体，其特征在于，所述柠檬烯环氧水解酶LEH突变体为如下（1）-（9）中任一种：（1）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为亮氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为脯氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；（2）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为异亮氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为脯氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；（3）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为缬氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为脯氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；（4）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为异亮氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为丙氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；（5）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为苯丙氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为脯氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；（6）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为苯丙氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为丙氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；（7）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为苯丙氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为丙氨酸，且将第80位的异亮氨酸突变为苯丙氨酸，且将第114位的亮氨酸突变为缬氨酸，且将第116位的异亮氨酸突变为缬氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；（8）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为苯丙氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为丙氨酸，且将第116位的异亮氨酸突变为缬氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；（9）将柠檬烯环氧水解酶LEH序列的第53位氨基酸由酪氨酸突变为苯丙氨酸，且将第55位氨基酸由天冬酰胺突变为丙氨酸，且将第80位的异亮氨酸突变为苯丙氨酸，且将第116位的异亮氨酸突变为缬氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；上述蛋白质中所述柠檬烯环氧水解酶LEH的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。

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百度查询： 中国科学院天津工业生物技术研究所 柠檬烯环氧水解酶突变体及其催化合成手性氧/氮-杂环化合物