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申请/专利权人：山西农业大学

摘要：本发明属于药物制备技术领域，具体为一种肠道损伤及肠道菌群的保护方法，该肠道损伤及肠道菌群的保护方法的具体操作步骤如下：S1实验选样、分组：试验选用1日龄无特异性病原体SPF白来航鸡360只，随机分为6组，每组6个重复，本申请构建了雏鸡体内沙门氏菌感染模型，综合各项数据指标，葛根素剂量为100mgkg时效果最佳,对沙门氏菌的攻毒具有保护作用，可以改善雏鸡生长性能，改善肠上皮绒毛的损伤，发挥了抗炎作用，保护了机体的免疫系统。另外通过微生物16SrRNA分析发现葛根素可以通过调节肠道菌群来抵抗沙门氏菌诱导的炎症和损伤。通过本申请的研究结果表明，葛根素在替代抗生素控制家禽生产中沙门氏菌感染和提高食品安全方面具有潜力。

主权项：1.一种肠道损伤及肠道菌群的保护方法，其特征在于，该肠道损伤及肠道菌群的保护方法的具体操作步骤如下：S1实验选样、分组：试验选用1日龄无特异性病原体SPF白来航鸡360只，随机分为6组，每组6个重复，每个重复10只鸡，分组情况为：对照组CON、肠炎沙门氏菌感染组S、肠炎沙门氏菌感染+50mgkg葛根素组P50、肠炎沙门氏菌感染+100mgkg葛根素组P100、肠炎沙门氏菌感染+200mgkg葛根素组P200、肠炎沙门氏菌感染+400mgkg葛根素组P400，CON组、S组饲喂基础饲粮，P50组、P100组、P200组和P400组分别在基础饲粮中添加相对应浓度的葛根素，饲养第6天开始进行攻毒，连续攻毒三天，在第6到8天，分别向S组、P50组、P100组、P200组和P400组雏鸡体内每天灌服1mL1×108CFUmL新鲜肠炎沙门氏菌培养液，而CON组则灌服等量无菌培养液，将各组家禽单独圈养，并自由获得无抗生素饲料和水；S2样本采样：分别在第10天和17天取材，每组取6只雏鸡的血液样品，然后在4摄氏度下，以4000g速度离心10分钟，获得透明的血清，解剖切除约2厘米的十二指肠、空肠和回肠段，用PBS缓慢冲洗，浸入4％多聚甲醛中固定进行组织学分析，收集盲肠内容物后续进行16SrRNA测序，放入-80℃保存，直到进一步分析；S3生长性能指标测定：在第1、6和17天记录体重，来计算平均日增重ADG，每三天记录一次饲料消耗的重量，进而计算平均日采食量ADFI以及料重比FeedGain,FG；ADG＝试验末平均体重-试验初平均体重试验天数，ADFI＝饲料总量-剩余饲料重量试验天数×每组鸡数，FG＝ADFIADG；S4血清酶联免疫吸附试验：炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1和、IL-6和免疫球蛋白IgM、IgG和IgA的水平通过Elisa试剂盒COIBOBIO,Shanghai,China和酶标仪进行测定；S5肠道组织形态观察：取材获得的肠道组织在4％多聚甲醛中固定，乙醇脱水、石蜡包埋，加工厂厚度为5μm的切片，再用苏木精和伊红HE染色，用中性树胶封片保存；S6肠道菌群分析：S6.1、总DNA的提取；S6.2、PCR扩增；S6.3、PE文库及Illumina测序；S6.4、生信分析；S7数据统计分析：该试验中的数据使用SPSS21.0IBM，USA软件进行数据统计分析，数据使用平均数±标准误Mean±SEM来表示，*代表p0.05，表示组间数据差异显著；**代表p0.01，表示组间数据差异极显著；S8结果分析：得出葛根素对感染沙门氏菌雏鸡生长性能的影响结果，得出葛根素对感染沙门氏菌雏鸡肠道组织形态的影响结果，得出血清炎症因子和免疫球蛋白水平的变化结果，得出葛根素对感染雏鸡盲肠微生物组成的影响结果；S9讨论分析：观察肠道组织形态的变化，观察肠道炎症的改善，观察对肠道菌群的影响。

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