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申请/专利权人：青岛科技大学

摘要：Hg2+和Ag+是两种具有严重毒性的、分布广泛的环境污染物，即使在低浓度下也会对环境和人类构成严重威胁，造成严重的、永久的损害。世界卫生组织对饮用水的标准作出了严格的限定。因此，建立高效、灵敏的可同时检测Hg2+和Ag+的分析方法对于环境监测、食品安全等领域至关重要。本发明提出了一种基于单激发的同时检测Hg2+和Ag+的方法，该方法利用单激发技术，采用基于核酸外切酶循环放大技术的纳米胶囊‑核酸生物分子复合物不但能够实现对Hg2+和Ag+的同时检测，而且在确保高特异性的前提下，检测灵敏度均得到显著提高，同时，还获得了对Hg2+和Ag+更宽的线性检测范围。

主权项：1.一种基于单激发的可同时检测Hg2+和Ag+的方法，其特征在于步骤如下：1将含有Hg2+和Ag+的溶液加入到由2种核酸生物识别分子、2种荧光信号分子和具有中空、多孔结构的纳米金构建而成的纳米胶囊-核酸生物分子复合物中，加入剪切酶EXOⅢ，放入37℃摇床反应1-3h；2磁分离，取上清液，用MOPS缓冲溶液稀释，进行荧光检测，给予单一波长的激发，同时检测与Hg2+和Ag+相对应的两种染料的荧光信号；所述的2种核酸生物识别分子分别是特异性识别Hg2+的5’-ATTCTTTCTTCCAAAAGGTGTTTTGTTT-3’和特异性识别Ag+的5’-TCCTCCCTCCTTAAGGAACCACCCACCA-3’；所述的2种荧光信号分子分别是罗丹明B和荧光素Cy5；所述的2种核酸生物识别分子是通过静电作用被分别组装到具有中空、多孔结构的纳米金表面；所述的纳米胶囊-核酸生物分子复合物的制备方法，包括如下步骤：1通过选择不同种类及其数量的碱基，分别设计并合成2种核酸生物识别分子，确保其分别对且仅对目标金属离子Hg2+或Ag+具有特异性的响应，而对其它任何共存离子和干扰离子没有响应；2将磁珠用pH＝7.4的MOPS缓冲溶液清洗后与具有中空、多孔结构的纳米金载体溶液混合，加入聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液，10-12h后磁分离，用pH＝7.4的MOPS缓冲溶液清洗；3加入荧光分子罗丹明B溶液，10-12h后加入可识别Hg2+的核酸生物分子溶液，10-12h后磁分离，用pH＝7.4的MOPS缓冲溶液清洗，备用；其中，所述的可识别Hg2+的核酸生物分子的碱基序列为5’-ATTCTTTCTTCCAAAAGGTGTTTTGTTT-3’，它和Hg2+的特异性结合产物能够被核酸外切酶剪切，释放出Hg2+；4在第2步的产物中加入荧光分子Cy5溶液，10-12h后加入可识别Ag+的核酸生物分子溶液，10-12h后磁分离，用pH＝7.4的MOPS缓冲溶液清洗，备用；其中，所述的可识别Ag+的核酸生物分子的碱基序列为5’-TCCTCCCTCCTTAAGGAACCACCCACCA-3’，它和Ag+的特异性结合产物能够被核酸外切酶剪切，释放出Ag+；5将3步和4步所得产物分别用pH＝7.4的MOPS缓冲溶液稀释后混合，磁分离，即可制得所述的纳米胶囊-核酸生物分子复合物。

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百度查询： 青岛科技大学 一种基于单激发的同时检测Hg²⁺和Ag⁺的方法