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申请/专利权人：青岛科技大学

摘要：Hg2+和Ag+是两种具有严重毒性的、分布广泛的环境污染物，即使在低浓度下也会对环境和人类构成严重威胁，造成严重且永久的损害。本发明提出了一种细胞内Hg2+和Ag+的同时荧光成像方法，该方法采用纳米胶囊‑核酸生物分子复合物能够灵敏、高效地实现对细胞内Hg2+和Ag+的同时荧光成像，本发明提出并构建的纳米胶囊‑核酸生物分子复合物具有结构简单、生物相容性好、设计巧妙、制备简单、性能稳定、细胞膜渗透能力强、胞内释放可控性强、对Hg2+和Ag+特异性强、响应时间短、便于实时监测等诸多优点，能够方便、快捷地实现细胞内Hg2+和Ag+的高灵敏、高选择性的同时荧光成像。

主权项：1.一种细胞内Hg2+和Ag+的同时荧光成像方法，其特征在于该方法采用了一种由2种核酸生物识别分子、2种荧光信号分子和具有中空、多孔结构的纳米金构建而成的纳米胶囊-核酸生物分子复合物；所述的2种核酸生物识别分子分别是特异性识别Hg2+的5’-TTTGTTTGTTGGAAAACCTTCTTTCTTA-3’和特异性识别Ag+的5’-ACCACCCACCAAGGAATTCCTCCCTCCT-3’；所述的2种荧光信号分子分别是罗丹明B和荧光素Cy5；所述的2种核酸生物识别分子是通过静电作用被分别组装到具有中空、多孔结构的纳米金表面；所述的细胞内Hg2+和Ag+的同时荧光成像方法步骤如下：1取适量细胞悬浮液，用含有Hg2+和Ag+的溶液对细胞进行培养后离心，移除上清液；2加入纳米胶囊-核酸生物分子复合物溶液进行孵育，10-50min后分别给予相应波长的激发进行细胞内Hg2+和Ag+的激光共聚焦扫描成像；其中，所述的纳米胶囊-核酸生物分子复合物的制备方法，步骤如下：1通过选择不同种类及其数量的碱基，分别设计并合成2种核酸生物识别分子，确保其分别对且仅对目标金属离子Hg2+或Ag+具有特异性的响应，而对其它任何共存离子和干扰离子没有响应；2在具有中空、多孔结构的纳米金溶液中加入聚二烯丙基二甲基氯化铵溶液，10-12h后离心分离，用pH＝7.0的MOPS缓冲溶液清洗；3加入荧光分子罗丹明B溶液，10-12h后加入可识别Hg2+的核酸生物分子溶液，10-12h后离心分离，用pH＝7.0的MOPS缓冲溶液清洗，备用；其中，所述的可识别Hg2+的核酸生物分子的碱基序列为5’-TTTGTTTGTTGGAAAACCTTCTTTCTTA-3’；4重复执行步骤2后加入荧光分子Cy5溶液，10-12h后加入可识别Ag+的核酸生物分子溶液，10-12h后离心分离，用pH＝7.0的MOPS缓冲溶液清洗，备用；其中，所述的可识别Ag+的核酸生物分子的碱基序列为5’-ACCACCCACCAAGGAATTCCTCCCTCCT-3’；5将步骤3和步骤4所得产物分别用pH＝7.0的MOPS缓冲溶液稀释后混合，离心分离，即可制得细胞内Hg2+和Ag+的同时荧光成像的纳米胶囊-核酸生物分子复合物。

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百度查询： 青岛科技大学 一种细胞内Hg²⁺和Ag⁺的同时荧光成像方法