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申请/专利权人：中国人民解放军海军军医大学
摘要：本发明涉及医药技术领域，提供了基于双头光亲和探针的生物活性分子结合靶标鉴定方法，包括双头光亲和探针制备、蛋白样品制备、以及生物活性小分子结合靶标的捕获、分离与鉴定三个大步骤。利用双头光亲和探针，给予全细胞提取蛋白复合物，经紫外光捕获，聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术可见特异性结合靶标，大大降低靶标鉴定的非特异性，可用于生物活性小分子的结合靶标鉴定研究，并有助于发现全新疾病结合靶标，具有良好的应用前景。
主权项：1.一种基于双头光亲和探针的生物活性分子结合靶标鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、双头光亲和探针制备所述双头光亲和探针由双头结合探针和双头捕获探针组成；所述双头结合探针的探针骨架与所述双头捕获探针的探针骨架碱基互补配对或特异性结合；所述双头结合探针的探针骨架两侧结合相同的生物活性分子，所述双头捕获探针的探针骨架两侧结合相同的光亲和分子，所述探针骨架两端经氨基修饰后与所述生物活性分子或光亲和分子发生活化酯反应，分别得到双头结合探针和双头捕获探针，经纯化、表征后备用，所述探针骨架为100bp的DNA骨架，所述生物活性分子为MLN8237；S2、蛋白样品制备从生物样本中提取蛋白样品，测试含量和纯度后富集；S3、生物活性分子结合靶标的捕获、分离与鉴定3.1捕获：将双头结合探针与双头捕获探针分别杂交，取一定浓度的双头光亲和探针与蛋白样品共孵，并将其置于光亲和分子激发光源下照射，激发光交联反应，使捕获探针有效锚定相关靶标蛋白，形成“蛋白-探针-蛋白”共价复合物；3.2提取：上述混合样品初步去除未结合的游离蛋白后，将所得沉淀干燥溶解；纯化、富集“蛋白-探针-蛋白”复合物后，去除游离探针；3.3分离与鉴定：将步骤3.2中的样品溶解后，采用一定方法对“蛋白-探针-蛋白”复合物进行分离，并对“蛋白-探针-蛋白”复合物进行鉴定，若探针两端蛋白一致则为生物活性分子靶点，若探针两端蛋白不一致则为非特异性结合，进而得到生物活性分子结合靶标，该生物活性分子结合靶标为极光激酶A；所述鉴定方法为非疾病诊断或治疗方法。
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权利要求：
百度查询： 中国人民解放军海军军医大学 基于双头光亲和探针的生物活性分子结合靶标鉴定方法
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