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申请/专利权人：浙江理工大学

摘要：本发明涉及生物医用材料领域，开了一种联合天然酶强化缺氧肿瘤光动力治疗的碳点纳米酶的制备方法。本发明首先利用水热法制得铂@甲苯胺蓝碳点纳米酶，再利用巯基‑聚乙二醇‑氨基和葡萄糖氧化酶合成巯基‑聚乙二醇‑葡萄糖氧化酶，再将其通过巯基与铂基的配位效应进行连接，最后用叶酸包覆铂@甲苯胺蓝‑聚乙二醇‑葡萄糖氧化酶碳点纳米酶，最终得到一种生物相容性好、单线态氧产率高的肿瘤光动力治疗材料。该纳米复合材料可通过具有多功能性，可以实现饥饿化动力光动力三协同治疗，通过葡萄糖氧化酶以及铂@甲苯胺蓝碳点纳米酶的级联反应效果实现在肿瘤微环境下的高单线态氧产率，可增强其抗肿瘤的效果，有望实际运用于肿瘤治疗。

主权项：1.一种联合天然酶强化缺氧肿瘤光动力治疗的碳点纳米酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：铂@甲苯胺蓝碳点纳米酶：将1.0-1.2g柠檬酸，0.3-0.4mL乙二胺，0.06-0.08g甲苯胺蓝和0.5-0.6g六水合氯铂酸在搅拌下加至20-30mL水中，将所得溶液在160-180℃下水热反应10-12h，冷却，过滤，滤液透析纯化，离心洗涤，冷冻干燥，得到铂@甲苯胺蓝碳点纳米酶；步骤2：巯基-聚乙二醇-葡萄糖氧化酶的制备：将20-40mg巯基-聚乙二醇-氨基溶于10-20mL2-吗啉乙磺酸缓冲液中，加入50-100mg1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和30-60mgN-羟基丁二酰亚胺，搅拌溶解，转移至摇床孵育活化，结束后加入10-20mL葡萄糖氧化酶溶液，调pH至6.5-7.0，摇床孵育过夜，离心收集沉淀，用水稀释得到1-2mgmL的巯基-聚乙二醇-葡萄糖氧化酶溶液；步骤3：铂@甲苯胺蓝-聚乙二醇-葡萄糖氧化酶碳点纳米酶的制备：将80-100mg铂@甲苯胺蓝碳点纳米酶分散于40-50mL磷酸缓冲盐溶液中，加入10-20mL巯基-聚乙二醇-葡萄糖氧化酶溶液，搅拌混匀，得到铂@甲苯胺蓝-聚乙二醇-葡萄糖氧化酶碳点纳米酶溶液；步骤:4：铂@甲苯胺蓝-聚乙二醇-葡萄糖氧化酶-叶酸碳点纳米酶的制备：将20-30mg叶酸溶于20-30mL硼酸盐缓冲液中配成叶酸溶液，加入10-20mL含有10-20mg1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和6-12mgN-羟基丁二酰亚胺的水溶液，搅拌溶解，转移至摇床孵育活化，结束后加入20-30mL铂@甲苯胺蓝-聚乙二醇-葡萄糖氧化酶碳点纳米酶溶液，摇床孵育过夜，透析纯化，离心超滤浓缩，即得铂@甲苯胺蓝-聚乙二醇-葡萄糖氧化酶-叶酸碳点纳米酶。

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