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申请/专利权人：南京鼓楼医院

摘要：本申请应用于编码人类红细胞MAM血型基因多态性、探索新等位基因变异等应用研究领域，基于MAM血型抗原编码基因EMP3的序列特征，公开了一种EMP3基因全外显子测序的方法，该测序方法设计四组扩增引物组及数个针对扩增片段的测序引物。首先通过设计扩增引物将人类红细胞MAM血型基因EMP3扩增出，结合提出的引物组合，测序技术可以精确获取目的基因全外显子核苷酸序列，可以用来对MAM血型编码基因序列测定并或发现未知变异。

主权项：1.一种编码人类红细胞MAM血型EMP3基因全外显子测序的方法，其特征在于，将EMP3基因分四部分先扩增再测序，所述四部分分别为：外显子1-3，外显子2-4，外显子4-5，外显子5-6；对外显子1-3进行PCR扩增反应，采取的扩增引物为：正向引物EMP13F1:5’-GCCCAATCTCAAGTCCATGC-3’反向引物EMP13R:5’-GCCAGAATGCCTTTAGAGGA-3’，对外显子1-3的扩增片段进行测序，采取的测序引物为：EMP13F1:5’-GCCCAATCTCAAGTCCATGC-3’；对外显子2-4进行PCR扩增反应，采取的扩增引物为：正向引物EMP24F1:5’-TCGGTAAGTTTCCAGTCCGTT-3’反向引物EMP24R1:5’-ACCCCTCACCATTCTCGCTGA-3’，对外显子2-4的扩增片段进行测序，采取的测序引物为：EMP24F1:5’-TCGGTAAGTTTCCAGTCCGTT-3’EMP35F2:5’-TCTTGGCTCATTGCAACCTT-3’；对外显子4-5进行PCR扩增反应，采取的扩增引物为：正向引物EMP45F:5’-CCCTTTTAGCTCTACCTCCGAT-3’反向引物EMP45R:5’-CTACAAGTCCCAGCAATCCCT-3’，对外显子4-5的扩增片段进行测序，采取的测序引物为：EMP45F:5’-CCCTTTTAGCTCTACCTCCGAT-3’EMP45R:5’-CTACAAGTCCCAGCAATCCCT-3’；对外显子5-6进行PCR扩增反应，采取的扩增引物为：正向引物EMP56F:5’-AGCTGGAACTCTGGACCCAC-3’反向引物EMP56R1:5’-GACCCCAAATGTTCAGTCCCT-3’，对外显子5-6的扩增片段进行测序，采取的测序引物为：EMP56F:5’-AGCTGGAACTCTGGACCCAC-3’EMP56S1:5’-GCAAAGGGCTAACTTAATCACAG-3’。

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