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摘要:一种诱导丛生芽同时增节增高增殖香花油茶的方法,选取成熟饱满的香花油茶种子,去除种皮作为外植体,经初始芽诱导培养的芽长度≥4.0cm时,将初始芽剪切成3种类型:顶芽、节段、下胚轴,分别接入3种继代增殖培养基中增殖培养。本增殖方法在诱导丛生芽长高的同时能缩短节间长度,增加节数,显著提高增殖系数;另本增殖培养方法不经过愈伤组织诱导,避免因为愈伤组织分化诱导可能发生的变异,能最大程度保持母本的优良性状,不仅为实现香花油茶组培工厂化育苗奠定基础;下胚轴增殖方法为实现农杆菌侵染遗传转化体系构建奠定基础。
主权项:1.一种诱导丛生芽同时增节增高增殖香花油茶的方法,其特征在于:包括初始芽诱导培养基配制、初始芽诱导培养、继代增殖培养基配制和继代芽增殖培养;主要操作步骤如下:1初始芽诱导培养基配制:初代诱导培养基配方为改良WPM+BA0.5~1.0mg·L-1+NAA0.1~0.2mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂4.5g·L-1,培养容器为高度9.5cm、直径6.6cm、口径6.3cm的240ml直口玻璃瓶,每瓶加入50mL培养基,121℃高压灭菌20min;2初始芽诱导培养:取成熟饱满的香花油茶种子,去除种皮作为外植体,经常规灭菌处理后接种到初代诱导培养基上进行初始芽诱导培养;3继代增殖培养基配制:继代增殖培养基①配方为改良WPM+2-IP1.0~2.0mg·L-1+NAA1.6~1.8mg·L-1+IAA0.5~1.5mg·L-1+BR0.3~0.5mg·L-1+PP333.0~6.0g·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂4.5g·L-1;继代增殖培养基②配方为改良WPM+2-IP1.0~2.0mg·L-1+NAA0.6~0.8mg·L-1+IAA0.5~1.5mg·L-1+PP333.0~6.0g·L-1+CPPU0.03~0.05mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂4.5g·L-1;继代增殖培养基③配方为改良WPM+2-IP0.6~0.8mg·L-1+NAA0.6~0.8mg·L-1+IAA1.5~2.5mg·L-1+PP333.0~6.0g·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂4.5g·L-1;在干净的环境中,按照以上所述增殖培养基配方分别配置好后,持续煮沸10min,调节pH值至5.8~6.0,分装到培养容器中,培养容器为高度14cm,直径9.5cm,口径5.3cm的650mL小口玻璃瓶,每瓶加入100mL培养基,121℃高压灭菌20min;4继代芽增殖培养:待初始芽长度≥4.0cm时,将初始芽剪切分成顶芽、节段和下胚轴3种类型,分别接入3种继代增殖培养基中进行增殖培养;培养50~60d后基部膨大诱导分化出丛生芽;当丛生芽高4.5~8.0cm,含5~12个芽和6~8个茎节时,将丛生芽切分成顶芽、节段和小丛芽,再次分别接入3种继代增殖培养基中进行增殖培养。
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