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摘要：本发明公开了多交叉置换恒温扩增结合金纳米颗粒横向侧流生物传感检测光滑念珠菌的方法，属于生物检测技术领域。MCDA检测引物包括两条置换引物F1和F2，六条扩增引物C1、C2、D1、D2、R1和R2以及两条交叉引物CP1和CP2。本发明针对C.glabrata的ITS2基因设计一套MCDA扩增引物，建立了一套针对C.glabrata的快速、灵敏度高和特异性强的MCDA‑LFB检测体系。对C.glabrata的检测灵敏度低至10fg反应，极大提高检测精度，缩短检测时间，能够实现对C.glabrata的快速检测和应急检测。

主权项：1.一种MCDA反应体系在制备利用多交叉置换扩增MCDA方法检测光滑念珠菌的产品中的应用，其特征在于，所述MCDA反应体系包括：交叉引物CP160pmol和CP260pmol，置换引物F110pmol和F210pmol，扩增引物R130pmol、R230pmol、D1*30pmol、D230pmol、C1*20pmol和C220pmol，Betaine10mM，MgSO46mM，dNTP1mM，10×BstDNA聚合酶缓冲液12.5μL，链置换DNA聚合酶10U和模板1μL，加去离子水至25μL；所述MCDA反应体系在61～67℃反应40min；所述交叉引物CP1的序列如SEQIDNO.1所示，所述交叉引物CP2的序列如SEQIDNO.2所示；所述置换引物F1的序列如SEQIDNO.3所示，所述置换引物F2的序列如SEQIDNO.4所示；所述扩增引物R1的序列如SEQIDNO.5所示，所述扩增引物R2的序列如SEQIDNO.6所示，所述扩增引物D1*的序列如SEQIDNO.7所示，所述扩增引物D2的序列如SEQIDNO.8所示，所述扩增引物C1*的序列如SEQIDNO.9所示，所述扩增引物C2的序列如SEQIDNO.10所示；在所述扩增引物C1的5’端标记生物素，在所述扩增引物D1的5’端标记半抗原，获得新标记的扩增引物C1*和D1*；采用所述扩增引物C1*和D1*，在BstDNA聚合酶、链置换DNA聚合酶、扩增引物R1、R2、D2和C2存在下，使用目标基因片段作为模板恒温扩增DNA，获得含生物素和半抗原标记的双标MCDA基因片段；所述双标MCDA基因片段的扩增效果检测评价采用金纳米颗粒横向侧流生物传感器方法。

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百度查询： 贵阳市第一人民医院(贵阳市急救中心) 多交叉置换恒温扩增结合金纳米颗粒横向侧流生物传感检测光滑念珠菌的方法