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摘要：本发明提供了一种规模化富集哺乳动物组织中RNA结合蛋白的方法及其鉴定方法，属于生物技术领域。所述的方法包括如下步骤：通过代谢标记的方式在哺乳动物的RNA上引入炔烃修饰；对炔烃修饰后的小鼠依次进行原位PBS和甲醛灌注；封闭游离巯基，组织裂解后，基于巯基‑炔基点击化学反应对所述RNA进行生物素化标记，得到生物素标记RNA；用254nm紫外线对生物素标记RNA和RBPs进行特异性交联，固定RNPs；升温，使甲醛解交联；富集、洗脱后得到富集产物RBPs；对富集产物RBPs进行SDS‑PAGE和质谱分析。此方法能够全面系统的表征哺乳动物组织中RNA‑蛋白相互作用。
主权项：1.一种基于双交联串联巯基-炔基点击化学反应特异性富集哺乳动物组织中RNA结合蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：1通过代谢标记的方式在哺乳动物的RNA上引入炔烃修饰；2对炔烃修饰后的小鼠依次进行原位PBS和甲醛灌注，以原位交联哺乳动物中的RNA-蛋白及DNA蛋白-蛋白相互作用；3取甲醛灌注后的组织封闭游离巯基，组织裂解后，基于巯基-炔基点击化学反应对RNA进行生物素化标记，得到生物素标记RNA；4用254nm紫外线对生物素标记RNA和RBPs进行特异性交联，固定RNPs；5所述特异性交联后升温，使甲醛解交联；6所述解交联后进行富集、洗脱后得到富集产物RBPs；7对所述富集产物RBPs进行SDS-PAGE和质谱分析。
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百度查询： 中国中医科学院医学实验中心 一种规模化富集哺乳动物组织中RNA结合蛋白的方法及其鉴定方法
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