买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

摘要：本发明公开了一种百草枯快速检测方法及其检测盒，属于生物检测技术领域，包括检测盒主体和试纸条主体，胶体金微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针和时间分辨荧光微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针分别包被在不同试纸条主体的T线上，形成两个不同种类的试纸条主体，分别为胶体金免疫层析试纸条主体和时间分辨荧光免疫层析试纸条主体，采用4，4‑联吡啶为原料，通过半抗原制备两种可对血液、尿液样本中痕量百草枯进行直接检测的胶体金免疫层析试纸条主体和时间分辨荧光免疫层析试纸条主体，对全血样本中的检测限可达0.05ngml，检测时间少于10min，相比液质联用和表面增强拉曼光谱的检测技术，具备造价低廉、操作简便、检测速度快、结果易判别且灵敏度高等优势。

主权项：1.一种百草枯快速检测方法，包括检测盒主体1和试纸条主体9，其特征在于：所述检测盒主体1内部的试纸条主体9的测试制备方法如下：S1、检测试剂的准备，所述检测试剂的准备中所用试剂为乙基百草枯、甲酸、4,4'-联吡啶、1,1'-压乙基-2,2'-联吡啶二溴盐、碘化钠、碳酸氢铵、丙酮、十二水和磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠、胶体金微球、时间分辨免疫荧光微球、2-吗啉代乙磺酸、牛血清蛋白、鸡卵清蛋白、硝酸纤维素膜、玻璃纤维垫、样品垫、吸水纸、PVC背板；S2、抗百草枯抗体的制备，所述抗百草枯抗体的制备为以4,4-联吡啶为起始原料，通过碘甲烷甲基化、5-溴戊酸乙酯酯化、溴氢酸脱酯基等合成步骤，制备出半抗原N-甲基-N'-戊酸基-二吡啶二溴化物；S3、抗百草枯抗体的偶联，所述抗百草枯抗体的偶联为将步骤S2中的半抗原N-甲基-N'-戊酸基-二吡啶二溴化物分别与牛血清蛋白和鸡卵清蛋白两种蛋白偶联制备免疫抗原和包被抗原；S4、胶体金的标记，所述胶体金的标记为用0.2molLK2CO3溶液将胶体金溶液调节至pH7，加入抗百草枯单克隆抗体使其终浓度为10μgml，室温搅拌反应30min，再加入终质量浓度为4μgml的牛血清白蛋白进行60min封闭反应，然后离心除去游离抗体，最后复溶，获得胶体金微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针；S5、时间分辨荧光微球的抗体标记，所述时间分辨荧光微球的抗体标记为500μl荧光微球中加入450μl活化缓冲液，超声5min，然后向微球溶液中依次加入EDC和NHS溶液使其终浓度分别为0.1和0.2mmolL，室温振荡反应30min，15000rmin，离心10min，弃去上清液，将沉淀用500μl偶联缓冲液复溶，超声5min，加入10μl2mgml抗百草枯单克隆抗体，室温振荡反应2h，15000rmin，离心5min，向沉淀中加入500μl封闭缓冲液，4℃振荡反应过夜，将反应液以15000rmin，离心5min，弃去上清，加入1mlTris-HCl进行复溶，超声5min，获得时间分辨荧光微球标记的抗百草枯单克隆抗体探针；S6、试纸条的组装，所述试纸条的组装为用三维划膜喷金仪将包被抗原和羊抗小鼠-IgG分别包被于NC膜上，形成T检测线和C质控线，将组装好的试纸条大板用自动斩切机切割成宽4mm、长60mm的板条，装于塑料卡壳中，用压壳机压紧，放入带干燥剂的铝箔袋中，连续封口机封口后，常温保存，得到试纸条主体9；S7、百草枯的检测测试，所述百草枯的检测测试为取生物样品40μl-50μl与等体积浓度为0.01molL的PBS缓冲液混合，将样品滴加试纸条主体9的样品槽中，显色反应10min，当样品中无PQ时，T线上的包被抗原捕获金纳米微球标记的抗体或时间分辨荧光微球标记的抗体，T线显色，当T线颜色大于C线时，结果判定为阴性，当样品中存在PQ时，金纳米微球标记的抗体或时间分辨荧光微球标记的抗体优先与游离的PQ反应，T线显色与待测样品中的PQ浓度呈负相关，当T线颜色小于C线时，结果判定为阳性。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 深圳市绿诗源生物技术有限公司 一种百草枯快速检测方法及其检测盒