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摘要：本发明公开了一种豹纹鳃棘鲈脑细胞系的构建方法及其应用。该豹纹鳃棘鲈脑细胞系的构建方法包括：步骤A：豹纹鳃棘鲈脑组织预处理；步骤B：豹纹鳃棘鲈脑细胞原代培养；步骤C：豹纹鳃棘鲈脑细胞传代培养。所构建的豹纹鳃棘鲈脑细胞系稳定性好，细胞分裂旺盛，传代时间较短，能够稳定传代80代以上，可提供大量的豹纹鳃棘鲈脑来源细胞，细胞能够维持良好的生长状态，可以对其进行冷冻保存。本发明所构建的豹纹鳃棘鲈脑细胞系对神经坏死病毒具有敏感性，接毒后均出现细胞病变。本发明细胞系可直接应用于病原特性研究及外源基因功能研究等。
主权项：1.一种豹纹鳃棘鲈脑细胞系的构建方法，其特征在于，包括：步骤A：豹纹鳃棘鲈脑组织预处理；所述步骤A包括：步骤A-1：从豹纹鳃棘鲈中取出完整脑组织；步骤A-2：将所述完整脑组织利用不同抗生素浓度的缓冲液冲洗和浸泡；步骤B：豹纹鳃棘鲈脑细胞原代培养；所述步骤B包括：步骤B-1：将所述步骤A-2中冲洗和浸泡后的所述完整脑组织进行消化和清洗得到第一沉淀，重复清洗3遍后得到第四沉淀，所述消化的消化液包含：0.25%胰蛋白酶，2mgmL胶原酶，5%胎牛血清和0.05%DNase1，所述消化反应温度为30℃；步骤B-2：将所述步骤B-1中所述清洗后获得的所述第四沉淀进行原代培养得到原代培养细胞；步骤C：豹纹鳃棘鲈脑细胞传代培养，所述步骤C包括：步骤C-1：将所述步骤B-2中所述原代培养细胞进行消化和清洗得到第五沉淀；步骤C-2：将所述步骤C-1中所述清洗后获得的所述第五沉淀进行传代培养得到所述豹纹鳃棘鲈脑细胞系。
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百度查询： 中国海洋大学三亚海洋研究院 一种豹纹鳃棘鲈脑细胞系的构建方法及其应用
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