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摘要：本发明涉及一种筛选再生水补水影响河道生物多样性的关键水质因子的方法，属于环境技术领域。包括步骤如下：步骤1：设置采样点，采集水样并过滤，提取DNA；步骤2：对提取的DNA进行测序与注释；步骤3：确定采样点水质指标并进行测定；步骤4：确定水质β多样性，利用水质指标结果和β多样性结果解析物种群落结构差异与水质因子之间的关联，筛选得到影响生物多样性的水质因子。本发明基于环境DNA技术的生物多样性监测方法，可以快速、低成本评价再生水河道补水后生物多样性的变化情况。

主权项：1.一种筛选再生水补水影响河道生物多样性的关键水质因子的方法，包括步骤如下：步骤1：设置采样点，采集水样并过滤，提取DNA；采样点设在再生水补给口及其上游、下游位置；步骤2：对提取的DNA进行测序与注释；提取的DNA，对不同生物类型选择不同的PCR引物进行测试；对浮游植物使用引物CITSF序列GCATCGATGAAGAACGCAG和CITSR序列CTTTTCCTCCGCTTATTGATATG扩增CITSF_CITSR区域，对浮游动物、底栖动物使用引物16SF1F序列GACTGTGCTAAGGTAGCRTRAT和16SR1R序列TAATCCAACATCGAGGTMGYA扩增16SF1F_16SR1R区域，对鱼类使用引物16S1634MF序列GCCTGTTTACCAAAAACATCAC和16S1634MR序列CTCCATAGGGTCTTCTCGTCTT扩增16S1634MF_16S1634MR区域；步骤3：确定采样点水质指标并进行测定；水质指标选自2个一般水质参数pH、COD，3个营养参数TN、TP、NH3-N，以及叶绿素a浓度Chla；步骤4：确定水质β多样性，利用水质指标结果和β多样性结果解析物种群落结构差异与水质因子之间的关联，筛选得到影响生物多样性的水质因子；对所得的序列均使用NCBI中的NT数据库进行注释；将同属同一类群的OTU进行合并后计算其Alpha多样性指数Shannon-Wiener，并使用Student’-test检验以及Kruskal-Wallis秩和检验计算两组间和多组间α多样性差异，通过对不同样本间Shannon-Wiener指数的比较评价再生水补充河道后对河流水生生物数目和丰度的影响；使用基于Bray-Jaccard距离算法的PCoA主坐标分析检验样本间生物群落结构的差异性，即β多样性差异，并结合PERMANOVA非参数检验，分析不同分组因素对样品差异的解释度，使用置换检验对划分的统计学意义进行显著性分析；利用水质指标结果和β多样性计算结果，使用CCARDA冗余分析方法，解析物种群落结构差异与水质因子之间的关联，筛选得到影响生物多样性的水质因子。

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