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一种禾本植物胚性干细胞及其获取方法、规模化培养方法和应用 

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摘要:本发明属于植物学领域,涉及利用生物技术方法培养禾本植物胚性干细胞,特别是指一种禾本植物胚性干细胞及其获取方法、规模化培养方法和应用。本申请利用自己设计的培养基以及圆锥状3D支架,大大提高了胚性干细胞的产量,在相同的培养时间内,胚性干细胞3D培养,浓度明显高于胚性干细胞普通培养。还通过动物实验证明了植物胚性干细胞具有防止脂质氧化,增强抗氧化酶活性,使机体更好地维持氧化与抗氧化系统的平衡、增强耐力和降低易感性疲劳的效果。

主权项:1.一种禾本植物胚性干细胞的获取方法,其特征在于,步骤为:(1)禾本植物的幼穗经清洁、消毒后收集幼穗上的小穗,真空抽气后再进行避光冷处理,经甘露醇溶液浸泡后转入改良MS液体培养基中;所述改良MS液体培养基中蔗糖含量为3wt%、IAA浓度为0.05wt%-1.0wt%;其中甘露醇溶液浸泡包括高浓度甘露醇溶液浸泡和低浓度甘露醇溶液浸泡;其中高浓度甘露醇溶液的体积浓度为30%、低浓度甘露醇溶液的体积浓度为0.5-1.5%;(2)将经步骤(1)处理的小穗的分生组织剥离,立即转入硫代硫酸钠溶液中,取出后将分生组织切成薄片转移至改良MS液体培养基中,进行恒温避光振荡培养Ⅰ,所得培养液经二次过滤,得初代禾本植物胚性干细胞;所述改良MS液体培养基中含有浓度为1.0mgL的两性霉素B、1.0%的双抗、1.0mgL的2,4-D、1.0mgL的NAA、30mgL维生素B1、8.0mgL维生素C和5.0mgL维生素E,其中双抗为抗青霉素和链霉素;恒温避光振荡培养Ⅰ的转速80-120rmin、温度为20-25℃、时间为24-36h;(3)将初代禾本植物胚性干细胞接种于改良MS液体培养基中,经恒温避光振荡培养Ⅱ,所得培养液经传代培养后,加入茉莉酸甲酯和吲哚丁酸进行避光诱导培养;茉莉酸甲酯的终浓度为80-120μML、吲哚丁酸的终浓度为20-40μML;恒温避光振荡培养Ⅱ的转速80-120rmin、温度为20-25℃、时间为24-48h;所述改良MS液体培养基中含有浓度为1.0mgL的两性霉素B、1.0%的双抗、1.0mgL的2,4-D、1.0mgL的NAA、30mgL维生素B1、8.0mgL维生素C和5.0mgL维生素E,其中双抗为抗青霉素和链霉素;(4)收集经步骤(3)诱导培养后的培养液,经离心、弃上清即得禾本植物胚性干细胞;所述禾本植物为小麦。

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