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摘要：本发明属于生物医学技术领域，涉及一种靶向性敲低脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法。本发明构建方法包括：构建GD3sKO小鼠；制备靶向性敲除小鼠AMPK表达的腺相关病毒AAV22Rretro‑AMPKknockdown；将所述腺相关病毒AAV22Rretro‑AMPKknockdown注射至所述GD3sKO小鼠中，得到所述小鼠模型。本发明制备得到的小鼠模型可以作为研究GBS疾病相关临床表型以及作用机制的动物模型使用，实验结果表明，AMPK的表达促进了AMAN小鼠神经轴索和髓鞘的再生，进而促进了AMAN小鼠损伤神经的再生。本发明小鼠模型为GBS疾病的诊断和治疗提供新的依据。
主权项：1.一种靶向性敲低脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法，其特征在于，包括：构建GD3sKO小鼠；制备靶向性敲除小鼠AMPK表达的腺相关病毒AAV22Rretro-AMPKknockdown；将所述腺相关病毒AAV22Rretro-AMPKknockdown注射至所述GD3sKO小鼠中，得到所述小鼠模型；所述注射的部位为双侧胫骨前肌，每侧剂量为2～5μL；所述注射的角度为15～45°；所述腺相关病毒AAV22Rretro-AMPKknockdown的制备方法包括：将靶向性敲低AMPK的腺相关病毒载体与辅助质粒pAAV-RC、腺病毒Helper质粒共同转染T细胞，培养后离心收集细胞沉淀，经裂解、纯化得到所述腺相关病毒；所述靶向性敲低AMPK的腺相关病毒载体的制备方法包括：基因合成AMPK的Prkaa1亚基、Prkaa2亚基，利用同源重组插入到骨架载体上；所述Prkaa1亚基miRNAi的靶序列如SEQIDNo.12所示，所述Prkaa2亚基miRNAi的靶序列如SEQIDNo.13所示；所述载体骨架为pAAV2-Hb9-eGFP-Cre-EGFP-WPRE-pA；所述腺相关病毒的病毒滴度为5.0E+12～5.0E+13。
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百度查询： 济宁医学院附属医院 一种靶向脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法
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