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一种提取检测拟南芥亚细胞组分无机元素的方法 

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摘要:本发明提供了一种提取检测拟南芥亚细胞组分无机元素的方法,属于分析化学领域。具体方法为采用差速离心法提取五种亚细胞组分:细胞壁、细胞核、叶绿体、线粒体和核糖体,基于微波消解结合电感耦合等离子体质谱分析,通过线性、检出限、合理性、回收率及重复性等系列的方法验证,得到可以准确、稳定和可靠地进行分析的拟南芥亚细胞组分的无机元素。该方法操作简单快速,结果准确可靠。方法可为植物亚细胞组分无机元素的分析提供技术支持和参考。

主权项:1.一种提取检测拟南芥亚细胞组分无机元素的方法,其特征在于:通过差速离心法提取拟南芥的亚细胞组分,采用微波消解前处理,电感耦合等离子体质谱分析检测,即ICP-MS分析检测,最后通过方法验证,得到拟南芥亚细胞组分无机元素;按照以下步骤进行:(1)称取拟南芥莲座叶的新鲜叶片450~500mg,加入提取缓冲液,用植物组织匀浆器磨碎,经尼龙纱布过滤,阻隔的沉淀部分记为细胞壁组分;将600g上清液离心10min,沉淀得到细胞核组分;将2000g上清液离心15min,沉淀得到叶绿体组分;继续将1000g上清液离心20min,沉淀得到线粒体组分;剩余上清液为核糖体组分;每个离心步骤重复两次,每次重复都需要将第一次离心得到的粗沉淀用缓冲溶液清洗后,在同一条件下离心,得到最终的沉淀组分;(2)微波消解前处理:将步骤(1)中提取的细胞壁组分和核糖体组分分别置于烘箱中烘干至1~2mL后进行微波消解,同一样品的细胞核组分、叶绿体组分和线粒体组分的两份沉淀合并后进行微波消解,消解完成后,待消解液冷却,将其转入容量瓶中,用超纯水洗涤消解罐3次,洗液合并于容量瓶中,用超纯水定容至25mL;拟南芥莲座叶叶片称取500mg,黄芪标准物质粉末称取150mg,微波消解后分别定容至50mL和100mL;(3)设置仪器参数,ICP-MS功率:1600W,等离子体氩气流速:18Lmin,辅助气流速1.2Lmin,载气流速0.94Lmin,雾化器雾化滞留时间50ms,仪器调谐需满足以下技术指标:常规分析灵敏度指标Be9:2000cps,In115:40000cps,U238:30000cps;背景值:Bkgd220≤1cps,氧化物156CeO+140Ce+:≤2.5%,双电荷离子70Ce2+140Ce+:≤3.0%,质量数和分辨率以Li7.016、Mg23.985、In115和U238在10%峰高处峰宽在0.65-0.8u范围;(4)ICP-MS分析检测:配制69种元素的混合标准溶液,随后将混合标准溶液分别用稀释溶液稀释,得到系列浓度梯度的标准溶液,按照浓度由低到高的顺序,对标准溶液依次进行ICP-MS分析,制作标准曲线;对拟南芥叶片、拟南芥亚细胞组分及黄芪标准物质的无机元素依次进行ICP-MS分析,根据外标法计算得到各样品中69种元素的含量;(5)方法验证:对方法的线性、检出限、合理性、回收率和重复性进行顺序表征,经过层层筛选,得到拟南芥亚细胞组分无机元素。

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