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摘要：本发明提供SNP位点基因型的检测方法及其试剂盒，所述方法包括针对含有一个待测SNP位点的靶标设计三条扩增引物：一条突变型引物，一条野生型引物和一条共用引物；所述突变型引物和所述共用引物配合用于扩增突变型模板，所述野生型引物和所述共用引物配合用于扩增野生型模板。本发明首次提出了利用不同荧光通道中的熔解曲线峰区分同一SNP位点的基因型，设计不同熔解曲线Tm值区分不同SNP位点的方法。
主权项：1.SNP位点基因型的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1：针对含有一个待测SNP位点的靶标设计三条扩增引物：一条突变型引物，一条野生型引物和一条共用引物；所述突变型引物和所述共用引物配合用于扩增突变型模板，所述野生型引物和所述共用引物配合用于扩增野生型模板；所述突变型引物3’末端碱基与突变型模板中SNP位点碱基互补或相同，所述野生型引物3’末端碱基与野生型模板中SNP位点碱基互补或相同；所述突变型引物Tm值和所述野生型引物Tm值相差±2℃之内，如果所述突变型引物长度和所述野生型引物长度相同，所述突变型引物和所述野生型引物除3’末端碱基不同之外，其余部分碱基相同；如果所述突变型引物长度和所述野生型引物长度不相同，所述突变型引物和所述野生型引物除3’末端碱基不同之外，所述突变型引物和所述野生型引物中长度长的引物5’末端比长度短的引物5’末端多1个或2个碱基，所述突变型引物和所述野生型引物其余部分碱基相同；步骤2：用不同荧光通道的两种荧光分别标记所述突变型引物和所述野生型引物，所述两种荧光在核酸单链中荧光发射低没有荧光，在核酸双链中发射高有荧光；步骤3：使用标记后的突变型引物、野生型引物和所述共用引物PCR扩增含有待测SNP位点的靶标，在PCR延伸阶段形成带有荧光标记的双链产物，扩增时，所述突变型引物的物质量和野生型引物的物质量之和与所述共用引物的物质量相等，进行对称PCR扩增；步骤4：扩增阶段完成后，随着温度的升高，扩增子双链逐渐解链使荧光信号强度随之减弱，形成不同荧光通道的熔曲峰；步骤5：根据不同荧光通道的熔曲峰结果判读所述待测SNP位点的基因型。
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百度查询： 北京百力格生物科技有限公司 SNP位点基因型的检测方法及其试剂盒
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