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摘要：本公开涉及一种多重数字PCR检测试剂盒及其检测方法，所述检测试剂盒包括对应靶点的检测引物、野生型阻滞探针blocker和检测探针，其中，所述对应靶点的检测引物包括上游引物和下游引物，所述靶点选自K‑ras、B‑raf、EGFR、ESR1、PIK3CA和N‑ras中的任一种或其任意组合。采用本公开的检测试剂盒可以同时检测多靶标，极大地缩减了样本用量、检测时间和检测成本，并且blocker降低了野生型模板扩增效率，有效减少野生型背景信号对检测的影响，从而有效提高本多重数字PCR检测体系的灵敏度和特异性。

主权项：1.一种用于检测基因突变的多重数字PCR检测试剂或检测试剂盒，其包括对应靶点的检测引物、野生型阻滞探针blocker和检测探针，其中，所述对应靶点的检测引物包括上游引物和下游引物，所述靶点为EGFR，所述基因突变为EGFRT790M突变；其中：用于检测EGFRT790M突变的上游引物为SEQIDNO.23所示的核苷酸序列；下游引物为SEQIDNO.26所示的核苷酸序列；EGFRblocker为SEQIDNO.29所示的核苷酸序列；检测探针为SEQIDNO.32所示的核苷酸序列或其5’端和或3’端具有其它荧光基团或淬灭基团修饰；所述其它荧光基团或淬灭基团选自：FAM、HEX、VIC、Cy3、cy5、Cy5.5、Cy7、AlexaFluor488、AMCA、AquaPhluor593、Allo425、Atto590、BODIPYFL、JOE、R110、NED、PacificBlue、Quasar570、Quasar670、TAMRA、FITC、TET、Texasred、YakimaYellow、BHQ1、BHQ3、MGB、Dabcyl、Eclipse；其中：SEQIDNO.23所示的核苷酸序列为：CTGCCTCACCTCCACCGSEQIDNO.26所示的核苷酸序列为：CACACACCAGTTGAGCAGGSEQIDNO.29所示的核苷酸序列为：C*TCATCA+C+G+CAG+CTCATGCCCTTC-ddCSEQIDNO.32所示的核苷酸序列为：ROX-CTCATCA+TG+CAGCTCATGCCCTTC-BHQ2；“+”表示其右侧碱基锁核酸修饰，“*”表示其右侧硫代磷酸修饰。

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