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黄花蒿U6启动子及应用 

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摘要:本发明提供黄花蒿U6启动子及应用,涉及基因工程技术领域。本发明从黄花蒿基因组中筛选并克隆了8个内源U6启动子,序列对比分析发现这8个启动子均含有保守的、影响其转录活性的两个顺式作用元件USE和TATA‑box。实验构建黄花蒿U6启动子驱动萤火虫荧光素酶基因LUC表达的融合表达载体,瞬时转化本氏烟草叶片,通过活体成像和双荧光素酶报告系统检测比较各个启动子的转录活性。结果表明,AaU6‑3、AaU6‑1、AaU6‑5启动子的转录活性均显著高于拟南芥AtU6‑26,其中AaU6‑3活性最高。综上,本研究筛选鉴定了3个具有较高转录活性的黄花蒿内源U6启动子,为黄花蒿基因编辑提供高效的启动子元件,对黄花蒿的分子育种和青蒿素的高效原料生产具有重要意义。

主权项:1.黄花蒿U6启动子,其特征在于:包括以下序列中的任一序列:1AaU6-3启动子序列,其核苷酸序列为:上游引物:5’-CCCAAATACAGAAAGAAATGC-3’,下游引物:5’-GGGCCATGCTAATCTTCTC-3’;2AaU6-1启动子序列,其核苷酸序列为:上游引物:5’-TGCACAAGGATTTCATCTTAA-3’,下游引物:5’-GGGCCATGCTAATCTTCTC-3’;3AaU6-5启动子序列,其核苷酸序列为:上游引物:5’-CGGTATTCAGATTAGTTCGC-3’,下游引物:5’-GGGCCATGCTAATCTTCTC-3’;所述黄花蒿U6启动子驱动向导RNAsgRNA的高效表达。

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