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申请/专利权人：武汉戴安生物技术有限公司
申请日：2024-02-02
公开（公告）日：2025-01-17
公开（公告）号：CN119320455A
专利技术分类：.抗酶[2006.01]
专利摘要：本发明公开了一种基于杂交瘤技术制备甲基假尿嘧啶单克隆抗体的方法，具体包括：实验动物准备、抗原合成、甲基假尿嘧啶与载体蛋白的偶连、动物免疫、抗血清效价检测、对筛选出的血清效价较好的小鼠进行细胞融合及亚克隆、阳性克隆DotBlot鉴定及抗体纯化、对制备得到的甲基假尿嘧啶单克隆抗体进行轻链测序和重链测序。本发明涉及生物工程技术领域，提供了一种基于杂交瘤技术制备甲基假尿嘧啶单克隆抗体的方法，该方法本方案采用甲基假尿嘧啶‑KLH作为免疫原，甲基假尿嘧啶‑BSA作为正向筛选原，同时尿嘧啶，假尿嘧啶作为负向筛选原的模式，筛选出只能特异性识别甲基假尿嘧啶的单克隆抗体。
专利权项：1.一种基于杂交瘤技术制备甲基假尿嘧啶单克隆抗体的方法，其特征在于，具体包括下述步骤：步骤1、实验动物准备准备多只8周龄的BalbC雌性健康小鼠；步骤2、抗原合成合成甲基假尿嘧啶、假尿嘧啶、尿嘧啶三种核苷酸作为抗原，后续用作免疫和筛选；步骤3、甲基假尿嘧啶与载体蛋白的偶连用NaIO4氧化甲基假尿嘧啶中的糖苷醇后，再与蛋白质偶联；步骤4、动物免疫第一次使用弗氏完全佐剂与等体积抗原充分混匀后对小鼠进行主注射，以后使用弗氏不完全佐剂与等体积抗原充分混匀后进行多次加强注射，进行动物免疫；步骤5、抗血清效价检测免疫结束后，尾静脉采血，用间接ELISA方法检测小鼠的血清效价，筛选出血清效价较好的小鼠；步骤6、对筛选出的血清效价较好的小鼠进行细胞融合及亚克隆；步骤7、阳性克隆DotBlot鉴定及抗体纯化，即获得可以特异性识别甲基假尿嘧啶的单克隆抗体；步骤8、对制备得到的甲基假尿嘧啶单克隆抗体进行轻链测序和重链测序。
百度查询： 武汉戴安生物技术有限公司 一种基于杂交瘤技术制备甲基假尿嘧啶单克隆抗体的方法
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