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申请/专利权人：阿苏萨医药科学有限公司

申请日：2015-04-17

公开（公告）日：2021-09-10

公开（公告）号：CN107002090B

专利技术分类：...专门适用于大肠杆菌以外之原核细胞宿主（如乳杆菌、小单孢菌）的载体或表达系统〔5〕

专利摘要：本发明的课题是，提供在双歧杆菌属细菌中，能够将异源多肽高效分泌到菌体外的信号肽、能够将异源多肽有效分泌到菌体外的表达盒、异源多肽表达载体、能够分泌异源多肽的双歧杆菌属细菌。作为其的解决手段，使用插入了依次包含在双歧杆菌属细菌中发挥作用的启动子DNA、和编码上述分泌信号肽的DNA、和编码具有抗肿瘤活性的单链抗体的DNA、和在双歧杆菌属细菌中发挥作用的终止子DNA的表达盒的载体而转化的双歧杆菌属细菌，能够有效地将单链抗体分泌到菌体外。

专利权项：1.一种在双歧杆菌属细菌内表达的表达盒，其特征在于，依次包含下述1～4的DNA：1在双歧杆菌属细菌中发挥作用的启动子DNA；2选自编码下述所示的分泌信号肽-接头连接体的DNA的任意一种DNA：编码SP7L5的DNA，其是在编码序列号6所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP7的DNA的3’末端，连接编码序列号25所示的氨基酸序列的连接肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP7L10的DNA，其是在编码序列号6所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP7的DNA的3’末端，连接编码序列号25所示的氨基酸序列的连接肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP7L15的DNA，其是在编码序列号6所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP7的DNA的3’末端，连接编码序列号25所示的氨基酸序列的连接肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP7L20的DNA，其是在编码序列号6所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP7的DNA的3’末端，连接编码序列号25所示的氨基酸序列组成的连接肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP45L0的DNA，其编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽；编码SP45L1的DNA，其是在编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP45的DNA的3’末端，连接编码序列号26所示的氨基酸序列组成的连接肽的C末端缺失了29个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP45L2的DNA，其是在编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP45的DNA的3’末端，连接编码序列号26所示的氨基酸序列组成的连接肽的C末端缺失了28个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP45L3的DNA，其是在编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP45的DNA的3’末端，连接编码序列号26所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了27个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP45L4的DNA，其是在编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP45的DNA的3’末端，连接编码序列号26所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了26个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP45L5的DNA，其是在编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP45的DNA的3’末端，连接编码序列号26所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP45L10的DNA，其是在编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP45的DNA的3’末端，连接编码序列号26所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP45L15的DNA，其是在编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP45的DNA的3’末端，连接编码序列号26所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP45L20的DNA，其是在编码序列号7所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP45的DNA的3’末端，连接编码序列号26所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP50L0的DNA，其编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽；编码SP50L1的DNA，其是在编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP50的DNA的3’末端，连接编码序列号27所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了29个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP50L2的DNA，其是在编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP50的DNA的3’末端，连接编码序列号27所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了28个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP50L3的DNA，其是在编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP50的DNA的3’末端，连接编码序列号27所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了27个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP50L4的DNA，其是在编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP50的DNA的3’末端，连接编码序列号27所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了26个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP50L5的DNA，其是在编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP50的DNA的3’末端，连接编码序列号27所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP50L10的DNA，其是在编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP50的DNA的3’末端，连接编码序列号27所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP50L15的DNA，其是在编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP50的DNA的3’末端，连接编码序列号27所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP50L20的DNA，其是在编码序列号8所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP50的DNA的3’末端，连接编码序列号27所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP52L5的DNA，其是在编码序列号9所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP52的DNA的3’末端，连接编码序列号28所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP52L10的DNA，其是在编码序列号9所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP52的DNA的3’末端，连接编码序列号28所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP52L15的DNA，其是在编码序列号9所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP52的DNA的3’末端，连接编码序列号28所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP52L20的DNA，其是在编码序列号9所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP52的DNA的3’末端，连接编码序列号28所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP55L5的DNA，其是在编码序列号10所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP55的DNA的3’末端，连接编码序列号29所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP55L10的DNA，其是在编码序列号10所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP55的DNA的3’末端，连接编码序列号29所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP55L15的DNA，其是在编码序列号10所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP55的DNA的3’末端，连接编码序列号29所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP55L20的DNA，其是在编码序列号10所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP55的DNA的3’末端，连接编码序列号29所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP58L15的DNA，其是在编码序列号11所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP58的DNA的3’末端，连接编码序列号30所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP58L20的DNA，其是在编码序列号11所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP58的DNA的3’末端，连接编码序列号30所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP64L0的DNA，其编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽；编码SP64L1的DNA，其是在编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP64的DNA的3’末端，连接编码序列号31所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了29个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP64L2的DNA，其是在编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP64的DNA的3’末端，连接编码序列号31所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了28个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP64L3的DNA，其是在编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP64的DNA的3’末端，连接编码序列号31所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了27个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP64L4的DNA，其是在编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP64的DNA的3’末端，连接编码序列号31所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了26个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP64L5的DNA，其是在编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP64的DNA的3’末端，连接编码序列号31所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP64L10的DNA，其是在编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP64的DNA的3’末端，连接编码序列号31所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP64L15的DNA，其是在编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP64的DNA的3’末端，连接编码序列号31所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP64L20的DNA，其是在编码序列号12所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP64的DNA的3’末端，连接编码序列号31所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP66L5的DNA，其是在编码序列号13所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP66的DNA的3’末端，连接编码序列号32所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP66L10的DNA，其是在编码序列号13所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP66的DNA的3’末端，连接编码序列号32所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP66L15的DNA，其是在编码序列号13所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP66的DNA的3’末端，连接编码序列号32所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP66L20的DNA，其是在编码序列号13所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP66的DNA的3’末端，连接编码序列号32所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP67L5的DNA，其是在编码序列号14所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP67的DNA的3’末端，连接编码序列号33所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP67L10的DNA，其是在编码序列号14所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP67的DNA的3’末端，连接编码序列号33所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP67L15的DNA，其是在编码序列号14所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP67的DNA的3’末端，连接编码序列号33所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP67L20的DNA，其是在编码序列号14所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP67的DNA的3’末端，连接编码序列号33所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP68L1的DNA，其是在编码序列号15所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP68的DNA的3’末端，连接编码序列号34所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了29个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP68L2的DNA，其是在编码序列号15所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP68的DNA的3’末端，连接编码序列号34所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了28个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP68L3的DNA，其是在编码序列号15所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP68的DNA的3’末端，连接编码序列号34所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了27个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP68L4的DNA，其是在编码序列号15所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP68的DNA的3’末端，连接编码序列号34所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了26个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP68L5的DNA，其是在编码序列号15所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP68的DNA的3’末端，连接编码序列号34所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了25个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP68L10的DNA，其是在编码序列号15所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP68的DNA的3’末端，连接编码序列号34所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了20个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP68L15的DNA，其是在编码序列号15所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP68的DNA的3’末端，连接编码序列号34所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了15个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；编码SP68L20的DNA，其是在编码序列号15所示的氨基酸序列组成的分泌信号肽SP68的DNA的3’末端，连接编码序列号34所示的氨基酸序列组成的连接信号肽的C末端缺失了10个氨基酸残基的连接肽的DNA的5’末端；3编码异源多肽的DNA；4在双歧杆菌属细菌中发挥作用的终止子DNA。

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