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申请/专利权人：电子科技大学中山学院;广东隆赋药业股份有限公司

摘要：本发明属于酶活性检测领域，涉及一种利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法。本发明使用浸提法从猪肝中提取过氧化氢酶，利用碘量法和高猛酸钾法测定猪肝中过氧化氢酶的活性，提供了一种准确度高、操作简便、可重复性强的鉴别成年猪肝和乳猪肝的检测方法。实验表明，在同等条件下，乳猪肝的过氧化氢酶活性要显著小于成年猪肝的过氧化氢酶活性，从而可以将猪肝中过氧化氢酶含量大小作为鉴别成年猪肝和乳猪肝的一个指标，本方法可以填补国内检测成年猪肝和乳猪猪肝方法和标准的空白，为药用乳猪肝原材料的检测提供了一种准确度高、操作简便、可重复性强的方法，具有很高的应用价值。

主权项：1.一种利用过氧化氢酶活性鉴别乳猪肝和成年猪肝的方法，该方法由下列步骤组成：S1，原料的准备：将冷冻的猪肝在冰水浴中隔水解冻或将其提前一夜置于4℃冰箱中自然解冻（也可直接用新鲜猪肝），用厨房纸巾抹干表面血水并剔除膜衣和结缔组织后切成合适大小；S2，粗酶液的制取：将猪肝和pH=7.0的1%甘露醇缓冲液按1:8的料液比加入干燥洁净的组织匀浆器中，先低速开启匀浆器，之后再慢慢转至高速，以防止溶液飞溅或猪肝附着于盖子上，约30S后关闭匀浆器，将得到的溶液先置于1.5ml离心管中密封好，冰水浴10min，之后将其抹干后，用高速离心机，在10000rmin条件下离心10min，离心后取上层清液，稀释10倍后得到粗酶液，粗酶液未使用时需置于冰水浴中，防止酶活出现变化；S3，过氧化氢酶活性的测定：在4个碘量瓶中分别加入10ml过氧化氢溶液并做好标记，置于25℃恒温水浴锅中水浴5min；先在其中一个碘量瓶中加入1ml浓硫酸，摇匀，1min后加入约50ml蒸馏水，加入三滴钼酸铵溶液，摇匀，加入足量碘化钾，摇匀后置于暗处反应5min，之后用硫代硫酸钠溶液滴定并记录数据；在剩下三个碘量瓶中各加入200ul粗酶液，准确反应3min后，加入1ml浓硫酸终止反应，摇匀，1min后加入约50ml蒸馏水，加入三滴钼酸铵溶液，摇匀，加入足量碘化钾，摇匀后置于暗处反应5min，之后用硫代硫酸钠溶液滴定并记录数据（也可采用高锰酸钾法测定过氧化氢酶活性）；测定需要三组以上，减少实验误差。

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