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申请/专利权人：北京大学
摘要：本发明公布了一种蛋白质异质索烃的生物合成方法。通过模拟天然拓扑蛋白质合成中的多步翻译后修饰过程，基于合理的基因序列设计，结合原位组装、链断裂和定点环化，发展了基于两种正交偶联方式的生物合成体系，可以实现蛋白质异质索烃的模块化合成。该方法利用p53dim结构域等缠结基元的分子内二聚来提高蛋白质异质索烃的产量，同时不需要额外的胞外反应。当多肽‑蛋白质反应对与断裂内含肽联用时，可以实现支化蛋白质异质索烃的生物合成；当两种正交断裂内含肽联用时，可以获得完全主链环化的蛋白质异质索烃。本发明拓展了拓扑蛋白质的合成方法，可以简洁地实现蛋白质异质索烃的生物合成。
主权项：1.一种蛋白质异质索烃的生物合成方法，包括以下步骤：1设计蛋白质异质索烃的蛋白质前体序列，其基本结构由N端到C端包括：L1-1-X-L1-2-原位酶切位点-L2-1-X-L2-2，其中，X代表形成二聚体的缠结基元，该缠结基元为同质或为异质，即两个X相同或不同；L1-1L1-2、L2-1L2-2代表在胞内发生正交偶联反应的两对环化基元，这两对环化基元为两种正交的多肽-蛋白质反应对，或者多肽-蛋白质反应对和断裂内含肽组合，或者两种正交的断裂内含肽；当L1-1L1-2为多肽-蛋白质反应对时，在L1-2与L2-1之间插入的原位酶切位点为必要元件，通过在胞内共表达蛋白酶对该位点进行原位酶切，否则所述原位酶切位点为非必要元件；在上述基本结构中插入目标蛋白序列，插入位点选自：X结构域前和或X结构域后、多肽-蛋白质反应对的N端和或C端；2构建步骤1）所述蛋白质前体序列对应的编码基因序列，并引入表达载体中；3将步骤2）构建的表达载体转入细胞中进行表达，当原位酶切位点为必要元件时在细胞内共表达切割所述原位酶切位点的蛋白酶；4对步骤3）获得的融合蛋白进行纯化，得到相应的蛋白质异质索烃。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京大学 一种蛋白质异质索烃的生物合成方法
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