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申请/专利权人：惠州绵俪生物科技有限公司

摘要：本发明涉及一种西青果提取物及其用途。具体而言，本发明涉及西青果提取物作为抗菌剂的用途，特别是美容或抗菌组合物的抗菌剂的用途。此外，本发明还涉及一种抗菌组合物，其包含本发明的西青果提取物、和任选的苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐和或任选的乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐。本发明还涉及所述西青果提取物的制备方法。

主权项：1.一种局部或皮肤施用的组合物，其为美容或化妆组合物，并包含抗菌组合物，所述抗菌组合物包含：a基于所述抗菌组合物计算，重量百分比为1.25%-2%的西青果提取物；和b基于所述抗菌组合物计算，重量百分比为0.1%-0.5%的苯甲酸钠;和基于所述抗菌组合物计算，重量百分比为0.2%的乙二胺四乙酸二钠；其中所述西青果提取物通过包括以下步骤的方法制备：1用水提取经碎片化的西青果以获得水提物，和2使所述水提物通过AB-8大孔吸附树脂，并且随后用乙醇水溶液洗脱，其中所述乙醇水溶液为质量分数为30%的乙醇，其中所述西青果提取物是以80-200gL的西青果最终西青果提取物的量从西青果中获得。

全文数据：一种西青果提取物及其抗菌用途发明领域总体而言，本发明涉及一种西青果提取物及其抗菌用途。本发明的西青果提取物特别适合在美容或化妆产品中用作抗菌剂。本发明还涉及一种抗菌组合物，其包含本发明的西青果提取物、和任选的苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐和或任选的乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐。所述抗菌组合物特别适用于美容或化妆产品。另外，本发明还涉及制备所述西青果提取物的方法。背景技术目前市售的大部分美容品或化妆品的剂型均属水溶性，水分含量高，且含有大量糖类、蛋白质或脂质等营养物质，因而提供微生物良好的养分和生长环境。这些美容品或化妆品使用过程或保存方式不当就容易滋生微生物而导致污染。产品一旦遭受到病原菌的污染，除了可能因活性成分降解而导致产品变质，还有可能直接感染使用者，严重危害消费者的健康。化学防腐剂能有效地控制微生物的生长，防止微生物对化妆产品造成污染，常用于化妆品和食品的化学防腐剂包括：咪唑烷基脲、咪唑烷-2,4-二酮、异噻唑啉酮、羟基苯甲酸乙酯、苯甲酸及其衍生物等化学防腐剂。然而，这些化学防腐剂可具有例如导致皮肤发炎等副作用，有一些更具有神经毒性和致癌作用。因此，这些化学防腐剂都不受消费者所欢迎，同时也是监管部门审查的重点，这常常影响产品的市场推广。由于防腐剂或抗菌剂在化妆品或美容品配方中占有很重要的角色，因此开发新的天然抗菌剂和抗菌组合物对化妆品工业具有迫切的需要和实际的意义。西青果，为中药名，又称藏青果，是使君子科植物诃子的干燥幼果。药典记载，西青果具有清热解毒等功效，已被应用于咽喉炎、扁桃体炎等症状。中国专利申请公布号CN108467417A描述了一种西青果提取物，其通过将粉碎的西青果依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯部分再经正相柱二氯甲烷-丙酮-甲酸体系梯度洗脱分离，获得的提取物具有抑制单胺氧化酶B活性，可用于治疗神经系统疾病。中国专利申请公布号CN102266360A描述了一种西青果提取物，其通过将粉碎的干西青果用乙醇提取，然后用正己烷萃取，再用水-甲醇梯度洗脱，获得的提取物具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，可用于治疗糖尿病。中国专利申请公布号CN104623245A描述了一种包含西青果提取物的清热生津的中药咀嚼片。中国专利申请公布号CN105029702A描述了一种西青果三醋酸提取物及其在卷烟中的应用。然而，目前没有任何文献或报道关于西青果提取物用作抗菌剂，特别是用作化妆品或美容品的抗菌剂。发明内容本发明的目的可包括提供一种天然的抗菌剂，特别是从植物果实例如粉碎的干燥果实中提取的天然抗菌剂。这样的抗菌剂没有化学抗菌剂的致敏感和致炎甚至神经毒性和致癌等副作用，因此特别适用于局部施用或皮肤施用，例如美容或化妆用途。当天然提取物被用于美容或化妆产品时，还要求该提取物不显著影响产品的物理性质例如颜色、气味和稳定性，否则会影响消费者对产品的购买意欲，导致产品市场价值下降。本发明的目的还可包括提供一种制备这样的天然提取物的方法。此外，本发明的目的还可包括提供一种包含所述天然抗菌剂的抗菌组合物和美容或化妆组合物。本发明的技术问题通过提供一种西青果提取物来解决，该西青果提取物通过本文描述的特定方法例如特定的提取和洗脱过程来制备。由于制备该提取物的方法有别于现有技术中的制备方法，因此本发明西青果提取物中的成分及其含量不同于现有技术中的西青果提取物。总体而言，本文提供了一种西青果提取物，其通过水提取和乙醇水溶液洗脱来制备。该提取物对各种细菌包括革兰氏阳性细菌和革兰氏以阴性细菌和真菌包括酵母等都具有显示出抑制效果，因此具有较为广谱的抑菌活性。此外，本发明的西青果提取对于美容化妆品的物理性质不构成负面影响，而且对人体皮肤具有安全性。另外，本发明的提供的抗菌组合物具有更广谱的抑菌活性，并且其中所含的化学抗菌剂的含量可以进一步减少。在一个方面，本发明涉及一种西青果提取物，所述提取物通过包括以下步骤的方法制备：1用水提取经碎片化的西青果以获得水提物，和2使所述水提物通过大孔吸附树脂，并且随后用乙醇水溶液洗脱。在一个方面，本发明的西青果提取物可以呈溶液形式或冻干形式例如冻干粉。在另一个方面，本发明涉及一种制备西青果提取物的方法，所述方法包括以下步骤：1用水提取经碎片化的西青果以获得水提物，和2使所述水提物通过大孔吸附树脂，并且随后用乙醇水溶液洗脱，从而获得所述提取物。在上述步骤1中，可使用本领域公知的设备或方法例如粉碎机将西青果碎片化例如粉碎，其中粉碎程度例如可为至少4目，优选至少10目，优选至少20目，例如30-200目，例如40目。在步骤1中，在向碎片化的西青果加入水后，进行加热回流提取，其中加热时间为至少30分钟，优选至少1小时，更优选1.5-10小时，例如2小时。在一个方面，上述方法还可包括以下步骤：1’将从步骤1获得的水提物进行离心，其中对获得的上清液进行后续步骤。在所述步骤1’中，可将离心获得的沉淀物再次进行步骤1的提取过程，并将获得的水提物进行离心，再次获得上清液并与之前的上清液合并，用于后续步骤。在该方面中，可对所述沉淀物进行至少1次重复提取，例如2-3次重复提取。在上述步骤2中，使所述水提物通过大孔吸附树脂是使活性成分吸附到所述树脂的过程。在该过程中使用色谱或层析分离技术，优选液相色谱或层析。使用的大孔吸附树脂可为弱极性大孔吸附树脂，更优选弱极性苯乙烯型大孔吸附树脂，最优选AB-8大孔吸附树脂。所述大孔吸附树脂是大孔吸附树脂柱的形式。在所述步骤2中，用乙醇水溶液洗脱是使活性成分从所述树脂中洗脱下来从而获得洗脱液的过程。在所述步骤中，使用5％-50％的乙醇水溶液，更优选8％-40％的乙醇水溶液，更优选10％-30％的乙醇水溶液，例如5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％或45％的乙醇水溶液。在所述步骤中，收集流经大孔吸附树脂的所述乙醇水溶液的洗脱液。在一个方面，上述方法还可包括以下步骤：3将从步骤2中获得的洗脱液中的乙醇去除。在所述步骤3中，可以用本领域已知的任何方法去除乙醇，例如使用旋转蒸发仪。在一个方面，上述方法还可包括以下步骤：4将从步骤3中获得洗脱液进行浓缩和任选的定容，从而获得呈溶液形式的提取物。在一个方面，上述方法还可包括以下步骤：5将从步骤4中获得西青果提取物冷冻干燥处理，从而获得呈冻干粉末形式的提取物。在上述方法中，所述西青果提取物是以30gL-300gL、优选50gL-200gL、更优选80gL-150gL、更优选100gL的西青果最终西青果提取物的量从西青果中获得。例如，100g的西青果经过碎片化和包含上述步骤1-4的方法处理之后，最后获得1L的西青果提取物，这对应于100gL的西青果最终西青果提取物的量。在一个方面，本发明涉及一种抗菌组合物，其包含本发明所述的西青果提取物。在该方面中，所述抗菌组合物可以进一步包含苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐。所述苯甲酸在所述抗菌组合物可以按可溶的形式或者离子的形式存在。例如，所述抗菌组合物可进一步包含苯甲酸钠或苯甲酸钾，优选苯甲酸钠。在另一方面，所述抗菌组合物可以进一步包含乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐。所述乙二胺四乙酸在所述抗菌组合物可以按可溶的形式或者离子的形式存在。例如，所述抗菌组合物可进一步包含乙二胺四乙酸钠盐或乙二胺四乙酸钾盐，优选乙二胺四乙酸二钠。在一个方面，所述组合物可包含本发明的西青果提取物、苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐、以及乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐。在一个方面，所述组合物还可包含溶剂，优选水。在一个方面，所述组合物可由上述抗菌组分和溶剂例如水组成。在上述抗菌组合物中，基于所述抗菌组合物计算，所述西青果提取物的重量百分比可为0.1％-20％，优选0.5％-10％，更优选1％-5％，更优选1.25％-2％，例如1.25％、1.5％、1.75％或2％。在所述抗菌组合物中，基于所述抗菌组合物计算，所述苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比可为0.01％-2％，优选0.05％-1％，更优选0.075％-0.75％，更优选0.1％-0.5％，例如0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％。在所述抗菌组合物中，基于所述抗菌组合物计算，所述乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比可为0.025％-1％、更优选0.05％-0.5％，更优选0.075％-0.35％，优选0.1％-0.3％，更优选0.125％-0.2％，例如0.1％、0.2％、0.25％或0.35％。在一个方面，本发明涉及上述西青果提取物或抗菌组合物用作局部或皮肤施用的产品例如美容产品或化妆产品的抗菌剂的用途。在一个方面，本发明涉及一种美容或化妆组合物，其包含上述西青果提取物或者抗菌组合物。优选地，所述美容或化妆组合物是基于水的美容或化妆组合物，例如洗液护肤液、乳液例如保湿乳液、精华液等。所述基于水的美容或化妆组合物较容易受到微生物的污染，因此本发明的抗菌剂特别适用于这样的组合物。在上述局部施用或皮肤施用的组合物中，基于所述组合物计算，所述西青果提取物的重量百分比可为0.1％-20％，优选0.5％-10％，更优选1％-5％，更优选1.25％-2％，例如1.25％、1.5％、1.75％或2％。在所述局部施用或皮肤施用的组合物中，基于所述组合物计算，所述苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比可为0.01％-2％，优选0.05％-1％，更优选0.075％-0.75％，更优选0.1％-0.5％，例如0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％。在所述局部施用或皮肤施用的组合物中，基于所述组合物计算，所述乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比可为0.025％-1％、更优选0.05％-0.5％，更优选0.075％-0.35％，优选0.1％-0.3％，更优选0.125％-0.2％，例如0.1％、0.2％、0.25％或0.35％。所述上述局部施用或皮肤施用的组合物可为美容或化妆组合物。根据一些实施方式，美容或化妆组合物为用于传统皮肤外部制剂的任何形式，包括但不限于面部美容诸如洗液护肤液、乳液、霜剂、和美容涂敷剂；补妆美容诸如预补妆、粉底、颊着色、唇膏、唇霜、眼睑膏、眼线笔、睫毛膏、和遮光剂；体用美容；香味美容；皮肤清洁剂诸如补妆去除剂、面部清洁剂、和体用香波；气溶胶、粉饼、霜剂、软膏、乳剂、香精、泡沫、凝胶、洗液、摩丝、糊剂、药膏补片、笔、浆液、溶液、小毛巾、面膜、体膜、或喷雾剂。例如，所述美容或化妆组合物可为溶液剂或混悬剂，例如基于水的溶液剂或混悬剂。在一个方面，本发明的西青果提取物或抗菌组合物适用于酸性或弱酸性的产品，优选为pH4.0-6.0。还考虑的是，除了美容或化妆组合物之外，本发明的西青果提取物或抗菌组合物可用于其他局部施用的组合物、皮肤施用的组合物或者口腔组合物，例如局部施用或皮肤施用的药物，包括如外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂或贴剂等；和例如口腔清洁产品或牙齿清洁用品，包括牙膏、牙粉、漱口水、口腔喷雾剂或牙线等。本文所述的术语“抗菌剂”或“抗微生物剂”可以互换使用，是指对细菌、酵母和霉菌等微生物的生长和繁殖具有抑制作用甚至杀伤所述微生物的物质。在本发明中，抗菌剂可以包括西青果提取物或者抗菌组合物。被本发明抗菌剂抑制或杀伤的细菌包括：革兰氏阳性细菌例如金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，和革兰氏阴性细菌例如肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌。被本发明抗菌剂抑制或杀伤的酵母包括白色念珠菌。被本发明抗菌剂抑制或杀伤的霉菌包括黑曲霉。本文所述的西青果提取物或抗菌组合物可以用作防腐剂。本发明所述的“防腐剂”是指用于加入食品、药品、特别是化妆美容品等的物质，以延迟在这些工业产品中微生物生长引起的腐败。当用作防腐剂时，期望的是这种防腐剂对于各种微生物包括细菌、酵母和霉菌具有广谱的抑制效果。文本所述的术语“美容上可接受的可溶性盐”是指所提供的浓度施用于皮肤时对人体是安全的、通常不干扰组合物中其他成分的活性、且在组合物中是可溶性的盐。所述盐可以是钠盐、钾盐等。对于美容或化妆组合物而言，抗菌剂具有广谱的抑菌活性是特别有利的，由此可以减少其他类型抗菌剂的加入。同时，还需要考虑广谱抗菌剂自身在用于美容或化妆组合物时不会对皮肤或人体产生副作用，因此天然抗菌剂相对于化学抗菌剂显然更有利。现有技术的难题在于找到一种既广谱、又不会产生副作用、同时与美容化妆组品相容例如保持产品的稳定性、均一性和良好外观的抗菌剂。这样的技术难题通过提供本发明的西青果提取和抗菌组合物得以解决。本发明还涉及以下实施方案：1.一种西青果提取物，所述提取物通过包括以下步骤的方法制备：1用水提取经碎片化的西青果以获得水提物，和2使所述水提物通过大孔吸附树脂，并且随后用乙醇水溶液洗脱。2.实施方案1的西青果提取物，其中所述大孔吸附树脂是弱极性大孔吸附树脂。3.实施方案2的西青果提取物，其中所述大孔吸附树脂是弱极性苯乙烯型大孔吸附树脂。4.实施方案2的西青果提取物，其中所述大孔吸附树脂是AB-8大孔吸附树脂。5.实施方案1或2的西青果提取物，其中所述乙醇水溶液包含5％-50％的乙醇。6.实施方案1或2的西青果提取物，其中所述乙醇水溶液包含8％-40％的乙醇。7.实施方案1或2的西青果提取物，其中所述乙醇水溶液包含10-30％的乙醇。8.一种抗菌组合物，其包含实施方案1-7中任一项的西青果提取物。9.实施方案8的抗菌组合物，其还包含：苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐，和或乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐。10.实施方案9的抗菌组合物，其中苯甲酸的美容上可接受的可溶性盐为苯甲酸钠。11.实施方案9的抗菌组合物，其中乙二胺四乙酸的美容上可接受的可溶性盐为乙二胺四乙酸二钠。12.实施方案8-11中任一项的抗菌组合物，其中基于所述抗菌组合物计算，所述西青果提取物的重量百分比为0.5％-10％。13.实施方案8-11中任一项的抗菌组合物，其中基于所述抗菌组合物计算，所述西青果提取物的重量百分比为1％-5％。14.实施方案8-11中任一项的抗菌组合物，其中基于所述抗菌组合物计算，所述西青果提取物的重量百分比为1.25％-2％。15.实施方案8-11中任一项的抗菌组合物，其中所述西青果提取物是以50-300gL的西青果最终西青果提取物的量从西青果中获得。16.实施方案8-11中任一项的抗菌组合物，其中所述西青果提取物是以80-200gL的西青果最终西青果提取物的量从西青果中获得。17.实施方案8-11中任一项的抗菌组合物，其中所述西青果提取物是以100gL的西青果最终西青果提取物的量从西青果中获得。18.实施方案12的抗菌组合物，其中基于所述抗菌组合物计算，所述苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比为0.05％-1％；和或所述乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比为0.075％-0.5％。19.实施方案12的抗菌组合物，其中基于所述抗菌组合物计算，所述苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比为0.075％-0.75％；和或所述乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比为0.1％-0.3％。20.实施方案12的抗菌组合物，其中基于所述抗菌组合物计算，所述苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比为0.1％-0.5％；和或所述乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比为0.125％-0.2％。21.实施方案1-7中任一项的西青果提取物或者实施方案8-20中任一项的抗菌组合物用作美容或化妆产品的抗菌剂的用途。22.一种局部或皮肤施用的组合物，其包含实施方案1-7中任一项的西青果提取物或者实施方案8-20中任一项的抗菌组合物。23.实施方案22的组合物，其为美容或化妆组合物。24.实施方案22或23的组合物，其中基于所述局部或皮肤施用的组合物计算，所述西青果提取物的重量百分比为1％-5％。25.实施方案22或23的组合物，其中基于所述局部或皮肤施用的组合物计算，所述西青果提取物的重量百分比为1.25％-2％。26.实施方案22或23的组合物，其包含重量百分比为0.075％-0.75％的苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐，和或重量百分比为0.1％-0.3％的乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐，其中所述重量百分比基于所述局部或皮肤施用的组合物计算。27.实施方案22或23的组合物，其包含重量百分比为0.1％-0.5％的苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐，和或重量百分比为0.125％-0.2％的乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐，其中所述重量百分比基于所述局部或皮肤施用的组合物计算。附图简述图1.西青果30％乙醇洗脱液和不同浓度EDTA-2Na组合对铜绿假单胞菌及黑曲霉的抑菌反应。图2.金黄色葡萄球菌在不同浓度苯甲酸钠处理后，生长曲线后移，生长变缓效应。图3.金黄色葡萄球菌在实施例7的防腐抗菌组合物A、B、C处理后，生长停滞现象。图4.大肠杆菌在不同浓度苯甲酸钠处理后，生长曲线后移，生长变缓效应。图5.大肠杆菌在实施例7的防腐抗菌组合物A、B、C处理后，生长停滞现象。图6.各种抗菌剂的吸收光谱。Absorbance:吸光度，Wavelength:波长。具体实施方式除非另有说明，否则本文使用的所有科学术语都和本领域一般技术人员通常理解的含义一致。下文描述了示例方法和材料，可以使用其等同物。本文提及的所有出版物和其它参考文献都通过引用整体结合到本文中。提供以下的实施例是为了进一步阐述本发明。以下实施例无意以任何理由限制本发明的范围。实施例实施例1–西青果提取物及其冻干粉的制备A.西青果提取物–乙醇洗脱液的制备1.取100g西青果，用粉碎机粉碎至40目，按照质量体积料液比1:10加入蒸馏水，加热回流提取2h。2.3000rmin离心10min，收集上清。沉淀物重复提取两次，合并上清，获得西青果水提物。3.上AB-8大孔树脂柱纯化，分别用质量分数为10％、20％和30％的乙醇进行洗脱，收集各个浓度乙醇下分别获得的洗脱部分，将洗脱液用旋转蒸发仪脱除乙醇。4.将西青果洗脱液浓缩定容至1L，放在-80℃冰箱保存。B.西青果水提物的制备在上述步骤1和2之后，将西青果水提物定容至1L。C.西青果提取物–冻干粉的制备将通过以上步骤1-4获得的西青果提取物进一步冻干，获得西青果提取物的冻干粉。实施例2–抗菌剂SGT的检测根据微生物生长曲线，我们可以确定从滞后期进入指数期的时间，即开始生长时间StartGrowingTime,SGT。微生物在加入抗菌剂后存活数量会减少，且细胞也受到一定程度的破坏，导致滞后期延长，SGT增加即生长曲线右移。把加入了试验药物的微生物生长曲线的SGT与空白对照组的SGT比较，便可知道组合物对于微生物的抑制效果。分别使用实施例1制备的西青果水提物，检测对于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的SGT，青霉素链霉素作为阳性对照，结果如下。表1.不同浓度的西青果水提物对于金黄色葡萄球菌的抑制能力表2.不同浓度的西青果水提物对于大肠杆菌的抑制能力实施例3–使用存活菌数测定西青果提取物的抗菌活性采用中国药典2015版第四部通则1121《抑菌效力检测法》中表1所示的试验菌株和按照表内的培养条件进行培养。把各个菌种分成4份并在无菌操作下培养，直至菌种接菌量达105-106cfumL。根据通则表2-2的要求把供试的试验菌株加入供试样本中培养2天、7天及14天。使用平皿法包括倾注法及涂布法——中国药典2015版第四部通则1105，计算各试验组的平均菌落数。分别使用实施例1描述的方法制备的西青果的水提液未经色谱分离、10％乙醇洗脱液、20％乙醇洗脱液、30％乙醇洗脱液、和化妆品常用化学防腐剂GLP，0.1％-0.5％为平均加入量，检测他们对代表性细菌包括革兰氏阳性和阴性细菌和酵母的抑制活性。结果如表3所示。表3.利用平皿法比较西青果提取物与传统化学防腐剂在不同菌种上的抑菌能力此外，西青果的水提液、10％乙醇洗脱液和30％乙醇洗脱液对于大肠杆菌的抑菌能力也是相近的，达到++的级别，而阳性对照GLP是+++。发明人发现，以乙醇来进行洗脱将有效去除西青果水提物的颜色下文实施例8验证，同时保留了对不同菌种的抑菌能力。该实验表明，西青果水提物和乙醇洗脱液不仅对细菌包括G+和G-具有抑制活性，而且对真菌例如白色念珠菌也具有抑制活性。这表明西青果提取物可以作为广谱的抗菌剂用于美容化妆产品。实施例4–西青果提取物与乙二胺四乙酸二钠组合的抑菌效果乙二胺四乙酸二钠EDTA-2Na通常在化妆品中用作稳定剂。发明人发现，使用西青果提取物30％乙醇洗脱液的冻干粉与EDTA-2Na组合能够增强抗菌的广谱性。使用以下成分的组合，检测它们对铜绿假单胞菌和黑曲霉的抑制效果。表4.包含西青果提取物和EDTA-2Na的组合物上表4中，1.75g的冻干粉相当于20g或mL的30％乙醇洗脱液，而1.05g的冻干粉相当于12.5g或mL的洗脱液。结果如图1所示，包含西青果提取物和EDTA-2Na的组合物能够有效抑制铜绿假单胞菌和黑曲霉的生长。实施例5-西青果提取物与苯甲酸钠组合的抑菌效果苯甲酸及其钠盐是常用的化学防腐剂，期望可以减少其在化妆品中的用量同时可以保留防腐剂的抑菌效果。分别制备0.1％、0.2％、0.3％、0.4％和0.5％的苯甲酸钠水溶液，使用实施例2所述的方法检测它们分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的SGT。另外，向这些苯甲酸钠水溶液加入12.5mgml的西青果30％乙醇洗脱液，同样检测它们的SGT。结果见下表。表5.单独的苯甲酸钠水溶液的SGT表6.单独的苯甲酸钠水溶液+西青果30％乙醇洗脱液的SGT使用12.5mgml的西青果提取物可大量减少化学防腐剂苯甲酸钠的使用量。另一方面，使用较低浓度的苯甲酸钠也可以降低西青果提取物自身的使用量，从而达到满意的抑菌效果。表5和6的效果结合实施例2和3的实验结果能够证明苯甲酸钠和西青果乙醇洗脱液在抑菌方面具有协同作用。实施例6–抗菌组合物的抑菌效果根据以下成分和配比配制本发明的抗菌防腐组合物。表7.不同成份含量的抗菌防腐组合物将西青果30％乙醇洗脱液、苯甲酸钠、乙二胺四乙酸二钠和余量的水加入小烧杯中，升温至40-60℃，搅拌至全溶后降至室温即得；或继续过滤，分装。1.实验菌株实验菌株包括：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉。2.牛津杯法测定抑菌圈的步骤：A.将细菌活化，并传代培养至OD595为0.3-0.5，稀释至106cfuml。分别均匀涂布在LB琼脂平板上；将真菌活化培养，并稀释至105cfuml，分别均匀涂布在孟加拉红琼脂平板上。B.将组合物A、B、C分别溶解于蒸馏水中，定容至100mL。C.将牛津杯放置在平板表面，在每个牛津杯内分别加入100μL抑菌组合物溶液，平行三个。D.平稳的移入恒温培养箱中，37℃静置培养16小时。用游标卡尺测量透明抑菌圈的直径。3.测定结果实验结果如下表，通过牛津杯法检测组合物的抑菌效果，结果表明组合物A、B、C分别对细菌、酵母和霉菌都具有较好的抑制效果。苯甲酸钠单独作用时，不能抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在平板上生长，未能形成透明抑菌圈；当西青果、EDTA-2Na和苯甲酸钠复配使用时，对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等微生物的增长起到抑制作用，牛津杯周围形成的透明抑菌圈直径大于8mm。表8.本发明的防腐抗菌组合物对于各种细菌、酵母和霉菌的抑制效果以上结果表明本发明的抗菌组合物具有较广谱的抑菌活性。实施例7–根据生长曲线确定抗菌组合物的抑菌效果根据微生物生曲线确定0.1％、0.3％和0.5％的苯甲酸钠水溶液以及由实施例6中制备的组合物A、B和C存在下金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长曲线。50μgml卡那霉素作为阳性对照。1.微生物生长曲线的绘制包括如下步骤：A.取10μL微生物菌悬液，至5mLLB培养基中，37℃培养16小时。B.第二天分别取10uL的菌悬液转移至5mL含有试验药物、空白对照与阳性对照50μgml卡那霉素LB培养基中，37℃培养16小时。C.第三天把包括试验药物、空白对照与阳性对照的所有培养液按5,000RPM离心处理5分钟，倒掉上清液。再分別用5mL新鲜LB培养基重新配制成菌悬液。重复由离心处理至重新配制成菌悬液的步骤两次以确保培养基中药物成分均被移除。D.取200μL菌悬液至96孔板中，每15分钟读取595nm下吸光值。按吸光值及时间点绘制微生物在不同试验药物、空白对照与阳性对照中的生长曲线。2.测定结果生长曲线滞后越多，表示药物或组合物对微生物的破坏能力越强，说明该药物或组合物的抑菌防腐效果越好。图2为苯甲酸钠单独作用于金黄色葡萄球菌16小时后，生长曲线的滞后现象。苯甲酸钠用量包括0.1％、0.3％和0.5％。图3为西青果、EDTA-2Na和苯甲酸钠共同作用于金黄色葡萄球菌16小时后，生长曲线停滞现象。图4为苯甲酸钠单独作用于大肠杆菌16小时后，生长曲线的滞后现象。对图5为西青果、EDTA-2Na和苯甲酸钠共同作用于大肠杆菌16小时后，生长曲线停滞现象。综上，西青果和苯甲酸钠组合使用能够增强对微生物的抑制作用。实施例8–本发明抗菌剂的物理性能测试在将抗菌剂应用于化妆美容产品的情况中，需要对抗菌剂在产品中的应用性进行评估。除了考虑抑菌配方原料的价格成本外，如果抗菌剂中的成分会导致产品发生物理性质的变化例如颜色和气味变化，将会影响消费者的购买意欲，导致产品市场价值下降。1.颜色测试使用分光光度仪检测本发明各种抗菌剂的从200nm到700nm的吸收光谱。检测的抗菌剂如下：1西青果水提物20mgml2西青果水提物30％乙醇洗脱液20mgml3西青果水提物30％乙醇洗脱液20mgml+0.125％EDTA-2Na+0.1％苯甲酸钠结果如图6所示。从图6可以看出，西青果水提物经过30％乙醇洗脱后抗菌剂2和3明显比洗脱前抗菌剂1吸光率减少。其中以波长420nm至700nm可见光最明显，表明抗菌剂2和3的可见颜色明显转淡。由于颜色会影响美容化妆品的观感，因此抗菌剂2和3适合用于所述产品。2.气味测试气味测试评估根据国际标准BSEN13725:2003的采用强迫选择法forcedchoice来进行气味浓度分析。所有配方气味浓度均为25至47OUEM3，平均为34OUEM3LOD＝6OUEM3按每小时气味释放率计算＝34X0.01M3s0.7101gX10003600＝0.133OUmgM3h所有配方抗菌剂1、2和3的气味浓度均远低于欧盟2010年草议工业气味释放率低于10OUmgM3h的标准。实施例9–包含本发明抗菌组合物的化妆品配方及其稳定性评价1.保湿乳液配方表9.保湿乳液配方2.稳定性评价为研究实施例6所制备的防腐剂组合物在化妆品中应用的稳定性，分别以表9的配方制备保湿乳液，分别编号为A、B、C。在常温条件下存放一个月，观察其稳定性。结果见下表。表10.包含本发明抗菌组合物在美容化妆组合物中的稳定性评价表10稳定性试验结果显示包含本发明抗菌剂的化妆品在各种条件下，能保持均一、稳定。对实施例8中的抗菌剂2和3进行类似的稳定性测定，结果同样显示包含所述抗菌剂的化妆品在一个月内稳定和均一。实施例10–化妆品的防腐效能测试为了测试本发明抗菌组合物在化妆品中的实际防腐能力，对包含所述组合物的保湿乳液配方进行了防腐效能测试。参考美国化妆品、盥洗用品和香精协会CTFA推荐的防腐体系效能评价方法，进行28天单次接菌挑战性实验。1.实验菌株：细菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌；霉菌黑曲霉和酵母菌白色念珠菌。采用混合菌接种。2.试验样品：按实施例9配方配制化妆品，每100g化妆品分别含抗菌防腐组合物A或B或C，所制备的化妆品分别编号为A、B、C。3.样品接种：分别称取实施例9的化妆品分别含组合物A、B、C各2份，每份100克，分别加入0.2mL细菌混悬液和0.2mL真菌混悬液，混合均匀，使细菌浓度为106CFUg，真菌浓度为104CFUg。将样品于室温22.5±2.5℃保存，并分别于0、7、14、21、28天检测化妆品中的菌落数，以判断化妆品的防腐效能。对比例为不含西青果，其他组分与A相同。4.实验结果表11由上表可知，本法发明抗菌组合物A、B、C在保湿乳液中使用，可以通过单次加菌-28天防腐挑战试验。实施例11–化妆品安全性评估皮肤敏感性测试：将不少于10名年龄有18-35岁的自愿参与研究者分为两组，分别为实验组和安慰剂组。实验以双盲模式进行，把加入了不同浓度的本发明抗菌剂的美容化妆品和空白对照和阳性对照在自愿者身上进行皮肤敏感测试，为期一个月。在测试期间，自愿者不得在测试的皮肤上涂上其他护肤产品。在自愿者的左右内侧进行测试。测试品先由无菌滤纸吸收，然后以低敏性的纱布和胶布固定位置。自愿者手内侧面的皮肤表面变化将会以相机记录。测试完毕后以问卷方式收集自愿者对产品的反应。所有自愿者包括实验组和安慰剂组涂上含有本发明抗菌剂的化妆品后，均没有出现红肿痕痒等过敏反应。

权利要求：1.一种西青果提取物，所述提取物通过包括以下步骤的方法制备：1用水提取经碎片化的西青果以获得水提物，和2使所述水提物通过大孔吸附树脂，并且随后用乙醇水溶液洗脱。2.权利要求1的西青果提取物，其中所述大孔吸附树脂是弱极性大孔吸附树脂，更优选弱极性苯乙烯型大孔吸附树脂，最优选AB-8大孔吸附树脂。3.权利要求1或2的西青果提取物，其中所述乙醇水溶液包含5％-50％的乙醇，优选8％-40％的乙醇，更优选10-30％的乙醇。4.一种抗菌组合物，其包含权利要求1-3中任一项的西青果提取物。5.权利要求4的抗菌组合物，其还包含：苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐，优选苯甲酸钠，和或乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐，优选乙二胺四乙酸二钠。6.权利要求4或5的抗菌组合物，其中基于所述抗菌组合物计算，所述西青果提取物的重量百分比为0.5％-10％，优选1％-5％，更优选1.25％-2％。7.权利要求4或5的抗菌组合物，其中所述西青果提取物是以50-300gL、优选80-200gL、更优选100gL的西青果最终西青果提取物的量从西青果中获得。8.权利要求6的抗菌组合物，其中基于所述抗菌组合物计算，所述苯甲酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比为0.05％-1％，优选0.075％-0.75％，更优选0.1％-0.5％；和或所述乙二胺四乙酸或其美容上可接受的可溶性盐的重量百分比为0.075％-0.5％，优选0.1％-0.3％，更优选0.125％-0.2％。9.权利要求1-3中任一项的西青果提取物或者权利要求4-8中任一项的抗菌组合物用作美容或化妆产品的抗菌剂的用途。10.一种局部施用或皮肤施用的组合物，其包含权利要求1-3中任一项的西青果提取物或者权利要求4-8中任一项的抗菌组合物，所述局部施用或皮肤施用的组合物优选为美容或化妆组合物。

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