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申请/专利权人：华东理工大学;苏州百福安酶技术有限公司

摘要：本发明涉及羟腈裂解酶突变体及其基因与应用，该羟腈裂解酶突变体是对如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第72位、73位、76位、110位、329位、331位、333位、340位、343位和358位组氨酸中的一个或多个氨基酸残基替换为其他氨基酸残基所形成的新氨基酸序列对应的蛋白质。与野生型羟腈裂解酶相比，本发明所述羟腈裂解酶突变体对2,2‑二甲基‑苯并[1,3]二噁烷6‑甲醛等大位阻底物醛的羟氰化活性和立体选择性均有大幅度提高，所述羟腈裂解酶的突变体尤其适合催化2,2‑二甲基‑苯并[1,3]二噁烷6‑甲醛，高效制备其相应的R‑氰醇中间体，可用于合成手性药物R‑沙美特罗，因此具有很好的工业合成应用前景。

主权项：1.一种羟腈裂解酶突变体，其特征在于，其是由下述任一氨基酸序列组成的蛋白质：1将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第72位苯丙氨酸替换为缬氨酸；2将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第73位丙氨酸替换为天冬氨酸、苏氨酸或天冬酰胺；3将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第76位亮氨酸替换为缬氨酸；4将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第110位天冬酰胺替换为丝氨酸；5将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第329位缬氨酸替换为半胱氨酸；6将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为缬氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、丙氨酸或甘氨酸；7将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第333位丝氨酸替换为缬氨酸或半胱氨酸；8将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第340位脯氨酸替换为亮氨酸或甲硫氨酸；9将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第343位亮氨酸替换为丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸；10将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第358位组氨酸替换为缬氨酸；11将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为半胱氨酸；12将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸；13将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第73位丙氨酸替换为天冬氨酸，第331位亮氨酸替换为丙氨酸；14将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第72位苯丙氨酸替换为缬氨酸，第73位丙氨酸替换为苏氨酸，第331位亮氨酸替换为丙氨酸；15将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第72位苯丙氨酸替换为缬氨酸，第111位丙氨酸替换为半胱氨酸，第331位亮氨酸替换为丙氨酸；16将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第340位脯氨酸替换为甲硫氨酸；17将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第340位脯氨酸替换为亮氨酸；18将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第343位亮氨酸替换为苯丙氨酸；19将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第72位苯丙氨酸替换为缬氨酸，第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第340位脯氨酸替换为甲硫氨酸，第358位组氨酸替换为缬氨酸；20将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第329位缬氨酸替换为半胱氨酸；21将如SEQIDNo.1所示氨基酸序列的第73位丙氨酸替换为天冬酰胺，第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第343位亮氨酸替换为苯丙氨酸。

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百度查询： 华东理工大学 苏州百福安酶技术有限公司 羟腈裂解酶突变体及在(R)-沙美特罗合成中的应用