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申请/专利权人：北京市农林科学院

摘要：本发明公开了一种核定位信号F4NLS及其在提高碱基编辑效率与拓展可编辑碱基范围中的应用。所述核定位信号F4NLS由核定位信号甲和核定位信号乙组成，所述核定位信号甲包括3*Flag标签蛋白和NLS蛋白；所述核定位信号乙包括所述NLS蛋白；所述3*Flag标签蛋白的氨基酸序列为序列10第1‑22位；所述NLS蛋白的氨基酸序列为序列11第1‑7位。通过实验证明：本发明的核定位信号F4NLS可提高碱基编辑效率和拓展可编辑碱基范围，在生物基因组编辑领域具有良好的应用前景。

主权项：1.一种水稻基因组靶点序列的编辑方法或提高水稻或水稻细胞基因组靶点序列的编辑效率的方法或拓展水稻或水稻细胞基因组靶点序列的可编辑碱基范围的方法，包括如下步骤：使水稻或水稻细胞内表达核定位信号甲、核定位信号乙、sgRNA、Cas9n核酸酶、脱氨酶和UGI蛋白质；所述核定位信号甲的氨基酸序列如序列10所示；所述核定位信号乙的氨基酸序列如序列11所示；所述sgRNA靶向靶点序列；所述sgRNA结构如下：所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架或tRNA-所述靶点序列转录的RNA-esgRNA骨架；所述esgRNA骨架为将序列1第617-702位中的T替换为U得到的RNA分子；所述tRNA为将序列7第474-550位中的T替换为U得到的RNA分子；所述Cas9n核酸酶的氨基酸序列如序列4所示；所述脱氨酶为腺嘌呤脱氨酶或胞嘧啶脱氨酶；所述腺嘌呤脱氨酶为ecTadA蛋白质和或ecTadA*蛋白质；所述胞嘧啶脱氨酶为rAPOBEC1蛋白质；所述ecTadA蛋白质的氨基酸序列如序列2所示；所述ecTadA*蛋白质的氨基酸序列如序列3所示；所述rAPOBEC1蛋白质的氨基酸序列如序列8所示；所述UGI蛋白质的氨基酸序列如序列9所示；所述核定位信号甲、所述核定位信号乙、所述sgRNA、所述Cas9n核酸酶、所述脱氨酶和所述UGI蛋白质通过重组表达载体导入水稻或水稻细胞；所述重组表达载体包括依次由启动子、所述核定位信号甲的编码基因、所述腺嘌呤脱氨酶ecTadA的编码基因、所述腺嘌呤脱氨酶ecTadA*的编码基因、所述Cas9n核酸酶的编码基因、所述核定位信号乙的编码基因和终止子组成的表达盒或依次由启动子、所述核定位信号甲的编码基因、所述胞嘧啶脱氨酶rAPOBEC1的编码基因、所述Cas9n核酸酶的编码基因、所述UGI蛋白质的编码基因、所述UGI蛋白质的编码基因、所述核定位信号乙的编码基因和终止子组成的表达盒。

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