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递送外源RNP的慢病毒载体及其制备方法 

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申请/专利权人:上海本导基因技术有限公司

摘要:本发明公开了一种递送外源RNP的慢病毒载体及其制备方法;通过将含有慢病毒载体基因组序列的质粒转染入病毒生产细胞,制备而得;所述基因组序列分别位于表达膜蛋白的质粒、表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达形成RNP所需蛋白质的质粒和表达含RNA结合蛋白所识别的RNA茎环结构的外源目的RNA的质粒上。在包装含RNP的慢病毒颗粒的过程中,补充慢病毒GagPol长链蛋白,减少了改造后的慢病毒GagPol长链蛋白所包含的外源RNA结合蛋白对病毒颗粒正常形态的负面影响,保证了慢病毒颗粒外壳的完整性和细胞感染活性的稳定性。

主权项:1.一种递送外源RNP的慢病毒载体,所述慢病毒载体是通过将含有慢病毒载体基因组序列的质粒转染入病毒生产细胞,制备而得;其特征在于,所述慢病毒载体基因组序列分别位于表达膜蛋白的质粒、表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达形成RNP所需蛋白质的质粒和表达含RNA结合蛋白所识别的RNA茎环结构的外源目的RNA的质粒上;所述表达膜蛋白的质粒包括表达VSV-G膜蛋白的质粒;所述表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒是将RNA结合蛋白整合至第三代慢病毒GagPol长链蛋白的N-端;所述表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒序列为SEQIDNO.5所示;所述表达慢病毒GagPol长链蛋白的质粒序列为SEQIDNO.2所示;所述表达形成RNP所需蛋白质的质粒为表达含外源蛋白质SpCas9的质粒,其质粒序列为SEQIDNO.8所示;所述表达含RNA结合蛋白所识别的RNA茎环结构的外源目的RNA的质粒是通过将RNA结合蛋白所识别的RNA序列与目的RNA序列融合而得到;所述质粒序列为SEQIDNO.10所示。

全文数据:

权利要求:

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